生物制药专业综合实验讲解[借鉴].pdfVIP

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2020-11-23 发布于福建
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生物制药专业综合实验讲解[借鉴].pdf

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生物技术制药实验课程实习讲义人表皮生长因子（ hEGF ）在大肠杆菌中的表达与纯化生物与制药工程学院制 2016 年 6 月 2 日目录第一节引言 2 1.1 表皮生长因子 (EGF) 概述 2 1.2 表皮生长因子 (EGF) 的结构与性质 2 1.3 EGF 的生物学效应及应用 3 1.4 本实验课程设计的目的与内容 4 第二节 EGF 基因的合成与转化表达 5 1.实验原理 5 2.实验材料与方法 5 2.1 实验材料及仪器 5 2.1.1 试剂材料及试剂 5 2.1.2 仪器设备 6 2.2 实验方法 6 2.2.1 试剂及培养基配制方法 6 2.2.2 目的基因 hEGF 的设计与合成 7 2.2.4 电泳检测质粒 DNA 8 2.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备 8 2.2.6 转化重组质粒进感受态大肠杆菌 BL21(DE3 ） 9 2.2.7 检测转化是否成功 9 2.2.8 双酶切并检测 9 2.2.9 EGF 基因的 PCR 扩增验证 9 2.2.10 目的基因的诱导表达及基因表达产物的 SDS检测 10 第三节 EGF 表达蛋白的纯化与检测 15 3.1 实验原理 15 3.2 可溶性 6xHis 重组蛋白纯化实验方法 15 3.3 6xHis 重组蛋白包涵体纯化与复性 17 第一节引言 1.1 表皮生长因子 (EGF)概述生长因子在人体中的信号传导部分起着关键的作用，它可通过与细胞表面的蛋白质受体结合，参与细胞的各种生命活动。生长因子可以是维生素，碱基，多肽等。所研究的表皮生长因子 ( Epidemal growth factor，EGF)，就是一种人机体细胞合成的一种多肽。在生物体内，每个细胞的生长状态不同，在不同组织中的细胞的表皮生长因子参与生长、增值、死亡等过程。目前，表皮生长因子已得到广泛应用。在许多公司已经开始研发甚至是生产出 EGF，多种疾病的诱发原因很多，我们可以用