测定蛋白酶活力实验.docxVIP

测定蛋白酶活力实验 一、实验目的 加深了解酶活力的概念。 学习掌握测定蛋白酶活力的方法。二、实验原理 酶活力指酶催化某一特定反应的能力。 其大小可用在一定条件下酶催化反应进行一定时间后， 反应体系中底物的减少量或产物的生成量来表示。 酶活力单位是表示酶活力大小的重要指标。 本实验规定酶活力单位(U) 为一定条件下每分钟分解 1μg 酪氨酸所需的酶量。 实验选用枯草杆菌蛋白酶水解酪蛋白产生酪氨酸的反应体系。 产物酪氨酸在碱性条件下与 Folin- 酚试剂反应生成蓝色化合物，该蓝色化合物在 680nm 处有最大光吸收，其吸光值与酪氨酸含量呈正比。 因此通过测定一定条件下产物酪氨酸的含量变化， 可计算出蛋白酶的活力。 三、仪器和试剂仪器 : 恒温水浴锅、分光光度计、试管及试管架、干燥滤纸、玻璃漏斗。 原料 枯草杆菌蛋白酶：称取 1g 枯草杆菌蛋白酶粉，用少量 0.02mol/L ， pH7.5 磷酸缓冲液溶解并定容至 100mL，震荡 15 分钟，使充分溶解，干纱布过滤，取滤液冰箱备用。 使用时视酶活力高低用缓冲液适当稀 释。 试剂 Folin- 酚试剂： 在 2L 磨口回流瓶中加入钨酸钠 (Na2WoO4. 2HO)100g，钼酸钠 (Na2WoO4. 2HO)25g，蒸馏水 700mL，85%磷酸 50mL 以及浓盐酸 100mL，充分混匀后，微火回流加热 10 小时。再加入硫