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;项目二 多肽类药物的原料制备与质量检验;蛋白质混合物的分离纯化方法
(以分子大小和形状为依据)
;学习内容:
(1)透析法
(2)超滤法
(3)凝胶过滤法
(4)密度梯度(区带)离心
学习重点:
(1)透析法
(2)凝胶过滤法;1. 透析法(dialysis):
原理:利用蛋白质大分子对半透膜的不可透过性而与无机盐、单糖等小分子物质分开;优缺点:操作简便,常用于蛋白质脱盐;费时
选材:玻璃纸、火棉胶或动物膀胱膜等
操作:将待提纯的蛋白质溶液装在半透膜的透析袋里,置于蒸馏水中进行
;2. 超滤法 (ultrafiltration):
原理:在一定压力或离心力的作用下,大分子物质被截留,小分子物质则滤过超滤膜而排出
分子量相近的蛋白质在介质中有呈线形溶质或球形溶质的区别,可能出现不同的结果
;应用:分级分离蛋白质,半透膜能截住不同大小的蛋白质,将大于某一相对分子质量和小于某一相对分子质量的蛋白质分开
膜材料与组件:人工合成膜 ;管式、卷式、平板式和中空纤维式
;3. 凝胶过滤法 (gel filtration):
原理:蛋白质溶液通过具有分子筛性质的凝胶,由于分子量(molecular weight)的差异而分离。洗脱时,大分子先流出,小分子后流出。
;操作:收集洗脱液,测定A280,根据洗脱曲线合并相同组分,使分子量大小不同的得以分离。
;4. 密度梯度(区带)离心
原理:蛋白质颗粒在离心时,质量和密度大的颗粒比质量和密度小的颗粒沉降得快,且每种蛋白质颗粒沉降到与其自身密度相等的介质梯度时,停止不前,各种蛋白质在离心管中被分离成各自独立的区带
;操作:常用塑料离心管,分成区带的蛋白质可在管底刺一小孔逐滴放出,分部收集。每个组分可进行小样分析,以确定区带位置。
;总结:蛋白质混合物的分离纯化方法(以分子大小和形状为依据)
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