生物制药与药品检验技术 寻找最适合的“水晶鞋”--蛋白质混合物的分离纯化方法2 课件： 蛋白质混合物分离纯化的方法（以分子大小和形状为依据）.pptx

;项目二 多肽类药物的原料制备与质量检验;蛋白质混合物的分离纯化方法 （以分子大小和形状为依据） ;学习内容： （1）透析法 （2）超滤法 （3）凝胶过滤法 （4）密度梯度（区带）离心 学习重点： （1）透析法 （2）凝胶过滤法;1. 透析法（dialysis）： 原理：利用蛋白质大分子对半透膜的不可透过性而与无机盐、单糖等小分子物质分开;优缺点：操作简便，常用于蛋白质脱盐；费时 选材：玻璃纸、火棉胶或动物膀胱膜等 操作：将待提纯的蛋白质溶液装在半透膜的透析袋里，置于蒸馏水中进行 ;2. 超滤法 （ultrafiltration）： 原理：在一定压力或离心力的作用下，大分子物质被截留，小分子物质则滤过超滤膜而排出 分子量相近的蛋白质在介质中有呈线形溶质或球形溶质的区别，可能出现不同的结果 ;应用：分级分离蛋白质，半透膜能截住不同大小的蛋白质，将大于某一相对分子质量和小于某一相对分子质量的蛋白质分开 膜材料与组件：人工合成膜 ；管式、卷式、平板式和中空纤维式 ;3. 凝胶过滤法 （gel filtration）： 原理：蛋白质溶液通过具有分子筛性质的凝胶，由于分子量（molecular weight）的差异而分离。洗脱时，大分子先流出，小分子后流出。 ;操作：收集洗脱液，测定A280，根据洗脱曲线合并相同组分，使分子量大小不同的得以分离。 ;4. 密度梯度（区带）离心 原理：蛋白质颗粒在离心时，质量和密度大的颗粒比质量和密度小的颗粒沉降得快，且每种蛋白质颗粒沉降到与其自身密度相等的介质梯度时，停止不前，各种蛋白质在离心管中被分离成各自独立的区带 ;操作：常用塑料离心管，分成区带的蛋白质可在管底刺一小孔逐滴放出，分部收集。每个组分可进行小样分析，以确定区带位置。 ;总结：蛋白质混合物的分离纯化方法（以分子大小和形状为依据）