全自动生化分析仪的常用检测方法PPT演示课件.ppt

（一）光学因素 1．非单色光的影响： Beer定律应用的重前提—入射光为单色光 照射物质的光经单色器分光后 并非真正单色光 其波长宽度由入射狭缝的宽度 和棱镜或光栅的分辨率决定 为了保证透过光对检测器的响 应，必须保证一定的狭缝宽度 这就使分离出来的光具一定的 谱带宽度 讨论 入射光的谱带宽度严重影响吸光系数和吸收光谱形状 E1＝E2 A=E1C·L E1≠E2 A与C不成线性关系，偏离Beer定律 （E2-E1)↑ A与C偏离线性关系越严重 结论： ● 选择较纯单色光（Δλ↓，单色性↑） ● 选λmax作为测定波长 （一）光学因素 2. 杂散光的影响 杂散光是指从单色器分出的光不在入射 光谱带宽度范围内，与所选波长相距较远。 杂散光来源：仪器本身缺陷；光学元件 污染造成 杂散光可使吸收光谱变形，吸光度变值。 （一）光学因素 3．反射光和散色光的影响： 反射光和散色光均是入射光谱带宽度内 的光直接对T产生影响。 散射和反射使T↓，A↑，吸收光谱变形 注：一般可用空白对比校正消除 4．非平行光的影响： 使光程↑，A↑，吸收光谱变形 （二）化学因素 溶液中的溶质可因 c 的改变而有离解、缔合、配位以及与溶剂间的作用等原因而发生偏离 L-B 定律的现象 。 例：在水溶液中，Cr(Ⅵ)的两种离子存在 如下平衡 　　Cr2O42- + H2O ? 2CrO42- + 2H+ 定量分析方法 (1) 标准曲线法 (2) 标准溶液对比法（外标一点法） (3) 吸光系数法 标准曲线法——最经典方法 前提：固定仪器和固定条件 过程：配置标准溶液系列 分别测定 A 得C~A曲线 样品 测定A样 查得C样 标准曲线法 标准溶液对比法 在相同的条件下，配制浓度为cs的标准溶 液和浓度为cx的试样溶液，在最大吸收波长处，分别测定二者的吸光度值为As、Ax ，依据朗伯-比尔定律得: As=Kbcs Ax=Kbcx 则: cx = cs*Ax /As 标准溶液对比法 吸光系数法 吸光系数法又称绝对法，是直接利用朗伯-比尔定律的数学表达式A＝Kbc进行计算的定量分析方法。在手册中查出待测物质在最大吸收波长 处的吸光系数 或 ,并在相同条件下测量样品溶液的吸光度A，则其浓度为： 或 内容 一 概述 二 基本原理 终点法 三 检测方法 固定时间法 连续监测法 终点法 终点法——通过检测终点吸光度的改变大小来求出被测物含量。 何为终点？如何判断？ 通常在反应终点附近连续选择两个吸光度值，求其平均值，根据两点的差值来判断反应终点。 终点法 终点时间的确认： 一、根据时间-吸光度曲线 如:Trinder反应测尿酸，反应曲线上3-5分钟 时其A趋向稳定,故可将5分钟作为反应终点。 二、根据被测物反应终点，结合干扰物的反应 情况来确定 如:溴甲酚绿法测血清白蛋白 分类 终点法： 一点终点法 二点终点法 免疫比浊法 双波长法 一点终点法 一点终点法——在时间-吸光度曲线上吸光度不再改变时，选择一个时间点测定吸光度值。 通常在反应终点附近连续读两个吸光度，求出两点的平均值，并根据两点的差值判断反应是否达到平衡。 一点终点法的设置： 以R和S混合之前的空气空白、水空 白或试剂空白的吸光度值为测定计算基点，以反应达到平衡的吸光度读数减去空白读数，校准曲线通过零点且成直线