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木瓜中多糖的提取、分离与鉴定 摘要：采取索氏抽提法、水提醇沉法、 乙醇回流提取法、复合提取法从木瓜中提取 多糖，经过分离纯化后，进行 IR鉴定。为 木瓜多糖的工业化生产提供了一定的理论 依据。 关键词：木瓜；多糖；提取；分离；鉴 定 0前言 多糖，又称多聚糖，是一种具有广泛生 物活性的大分子。从各种中草药和其他植物 中都可以提取分离出多糖， 我国近年来对植 物多糖，特别是具有中国特色的中草药多糖 的药物活性已有广泛报道。 木瓜原名番木瓜，始载于〈〈名医别录》， 属蔷薇科木瓜属植物，是我国特有果木之一， 主要生长在亚热带温暖湿润的山区地带， 是 一种药食同源的植物，性温味酸。现代医学 证明：木瓜果实中含有丰富的糖分、番木瓜 碱、木瓜蛋白酶，并含有 17种以上的氨基 酸及多种微量元素。目前已有大量木瓜产品 上市，如木瓜饮料、木瓜醋、木瓜奶、木瓜 酒、木瓜干片、木瓜脯等，深受人们的喜爱。 湖北建始县盛产木瓜， 但是创收的途径 主要是通过销售鲜木瓜或干木瓜，其他相关 产品的开发并不多见。从木瓜中提取和分离 鉴定具有保健和药理活性的功能性成分， 对 于提高木瓜的经济价值， 解决目前农民木瓜 丰产不丰收、大量木瓜急待加工开发的问题 具有积极的意义。 本实验对木瓜中多糖进行研究，拟对其 提取工艺进行优化，并对粗多糖进行分离纯 化鉴定组成和结构进行初步表征，为进一步 提高木瓜的附加值提供试验依据。 1材料与方法 材料 原料：湖北省建始县干木瓜片，粉碎机 粉碎 仪器：TDL-5-A 台式离心机，UV-7504 紫外-可见分光光度计，SHZ-m型循环水真 空泵，紫外扫描仪，付立叶变换红外光谱 仪，Prostar高效液相色谱仪等。 试剂：石油醍，丙酮，乙醇，戊醇，三 氯甲烷，氯化钠，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠， 硫酸，盐酸，苯酚，葡萄糖，乙醍，三氟 三氯乙烷，三氯醋酸，碘液 ，硫酸铜，酒 石酸钾钠，D-半乳糖，漠化钾，碳酸钥。 1. 2方法 多糖的测定：用苯酚-硫酸法对多糖测 定。 多糖的提取：①不同提取多糖方法的比 较。分别用索氏抽提法，水提醇沉法，乙醇 回流提取法，复合提取法提取木瓜中的多糖， 并比较多糖得率，选择较好的水提醇沉法进 行优化处理。 水提醇沉法提取多糖工艺的优化 单因素试验 a温度对提取率的影响：加水量为30ml, 水提时间为30分钟，分别在75C、80C、 85C、90C、95C的水浴条件下，提取多糖， 用苯酚-硫酸法测定其含量， b加水量对提取率的影响：水浴温度为 90C,水提时间为30分钟的条件下，改变 加水量，提取多糖，并采用苯酚 -硫酸法进 行测定， c水提时间对提取率的影响：水浴温度 为90C,加水量为40ml的条件下，不同的 水提时间对多糖得率的影响， 正交试验 根据单因素实验的结果，选取合适的水 平，对其进行优化处理。 多糖的分离、纯化。 蛋白质的去除：分别用 Sevage法， 三氟三氯乙烷法，三氯醋酸法去除样品中的 蛋白质。 低聚糖等小分子杂质的去除：通过逆 向流水透析除去低聚糖等小分子杂质。 多糖的柱层析纯化：采用DEAE-52纤 维素离子交换柱柱层析方法进行。 依次用/ L的NaOH HCl和蒸储水处理 填柱材料至中性，反复处理三次后用蒸储水 洗至中性，抽气装柱。用pH韬液平衡48小 时。称取粗多糖，溶于少量蒸储水中，离心 除去不溶物，上清液过柱。用/L的NaCl-PBS 溶液梯度洗脱，控制流速为1ml/min,采用 部分收集器按5ml/tub收集。以苯酚-硫酸 法测吸光值作洗脱曲线，根据吸光值将同一 组分合并。 多糖的鉴定。 淀粉的碘反应：将纯化后的得到的多 糖配制成5%勺溶液，滴加碘液，水浴加热， 观察颜色是否有变化，同时做淀粉的对比试 验。 溶解性：称取纯化后的多糖，加入3ml 的水，常温下搅拌，观察其溶解性。 还原糖的测定：取 mg/ ml的多糖溶 液50ml于试管中，在80C的恒温水浴锅中 保温30分钟，吸取6ml,加入4ml的斐林试 剂，于590nm处比色。 蛋白质的测定：将纯化得到的多糖在 190- 400nm处进行UV扫描，观察在 250-280nm处没有吸收峰，判断是否有核酸 和蛋白质的存在。 IR鉴定多糖中糖昔键的类型：将多糖 与漠化钾烘干后，称取多糖2mg与100mg的 漠化钾研磨，压片，置于红外图谱分析仪中 作红外分析。 HPL暧定多糖中单糖的组成：用高效 液相色谱法对木瓜多糖的单糖组成进行定 性鉴定。 样品的处理：称取纯化后的多糖，加 1mol / L的硫酸2ml,充N2后于100 C水浴 加热5h,用BaCO井和，膜过滤后作为待测 样品。 标准液的配制：称取葡萄糖、半乳糖 25mg分别溶于5ml的蒸储水中，配成 5mg / mL的标准液，膜过滤后待用。 色谱条件：以Aglient Z