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木瓜中齐墩果酸的提取、分离及鉴定 摘 要：从木瓜中提取？分离？鉴定齐墩 果酸？方法：采取回流法？索氏提取法和冷浸 法从木瓜中提取齐墩果酸，然后采用酸碱沉 降法？氯仿萃取法分离纯化，并用高效液相 色谱法进行鉴定？结果:结果显示回流法提 取效果最好？结论：为齐墩果酸的工业化生 产提供了一定的理论依据 ？ 关键词：木瓜;齐墩果酸；提取；分离；高 效液相色谱法 0前言 木瓜，又称皱皮木瓜，铁脚犁，酸木瓜等, 为蔷薇科木瓜属植物贴梗海棠的果实 ？木瓜 是具有食用，药用观赏的多用途植物，果实 成熟后，色泽金黄，气味芳香，果实营养极为 丰富？齐墩果酸(Oleanolic acid)，分子式为 C30H48O3是木瓜的主要有效成分，别名土 当归酸，大部分以游离酸或糖昔的形式存在 , 为五环三站类化合物，是我国首次从植物中 发掘出来的，是治疗急性黄疸型肝炎和慢性 病毒性肝炎比较理想的药物 ？ 本实验以干木瓜为原料，在单因素实验 的基础上设计正交实验，优化提取齐墩果酸 的最佳工艺条件？通过酸碱沉降或氯仿萃取 的方法分离纯化，最后经高效液相色谱法对 其进行鉴定？该种方法准确可靠，为初步研 究建始木瓜中齐墩果酸提供试验基础，为齐 墩果酸的工业化生产提供了一定的理论依 据？ 1材料与方法 材料 试验原料 干木瓜片，粉碎机粉碎 试验的主要仪器和设备 HH翌电热恒温水浴锅，RE52-99型旋转 蒸发器,722可见分光光度计，紫外分光光度 计，电子天平，分析天平，液相设备，分析 柱:Hypersil ODS25 叫 m ? 试验主要试剂 95知业酒精，分析醇的95吃醇？甲醇 ?冰醋酸？高氯酸？浓硫酸？乙酸乙酯？香草醛 齐墩果酸标准品？ 方法 齐墩果酸提取方法的比较 回流提取法：称取木瓜粉25g,分别 用100ml,80ml,70ml的95知业酒精在 60 C 下回流提取，时间依次为4,3,2小时,合并提 取液,用乙醇定容至250ml,作为供试样？ 索氏提取法：称取木瓜粉25g,用95% 工业酒精在索氏提取器中提取，在90 CT至 虹吸下溶液近无色(约8小时),将提取液转 移至250ml容量瓶,定容至刻度作为供试样？ 冷浸提取法：称取木瓜粉25g,用95% 工业酒精150ml浸提一周，再用100ml乙醇 浸提5天，合并浸提液，将提取液转移至 250ml容量瓶,定容至刻度作为供试样？ 比色法测定齐墩果酸的含量 精密称取香草醛，用移液管加入6ml冰 醋酸，配置成5海草醛-冰醋酸溶液？分别取 回流法，索氏提取法和冷浸法提取的样品 (每种做3个平行)加入试管中，加热挥发溶 剂，试剂空白为对照？精密加入新制的香草 醛-冰醋酸和高氯酸，在70 C恒温水浴加热 15分钟？流水冷却至室温,精密加入乙酸乙 酯4ml，摇匀,在波长560nm处测定吸光值, 比较三种方法提取率？ 回流提取的单因素实验 温度对提取率的影响：分别称取 10g木瓜粉,以95知业酒精，料液比为1:15, 按40,50,60,70,80 °C五个温度梯度提取 9h, 提取3次，合并提取液，定容至250ml?分别取 提取液加入试管中，通过比色法测定齐墩果 酸的含量(每个样品3个平行)？ 时间对提取率的影响：分别称取10g 木瓜粉，以95知业酒精，料液比为1:15,按 3h,5h,7h,9h,11h 五个时间梯度，置于60C 水浴锅，提取3次，时间间隔分别 为,1,;,,1h;3,,;4,3,2h;,,3h ?合并提取液 定容至250ml?分别取提取液加入试管中，通 过比色法测定齐墩果酸的含量 (每个样品3 个平行)？ 料液比对提取率的影响：按料液比 为 1:5,1:10,1:15,1:20,1:25, 以 95%E业酒 精,置于60C水浴锅中9h,提取3次，每次的 溶剂用量为 25,15,10ml;50,30,20ml;70,50,30ml;90,7 0,40ml;100,80,70ml ?合并提取液，定容至 250ml?分别取提取液加入试管中，通过比色 法测定齐墩果酸的含量(每个样品3个平行) ? 正交试验优化回流提取的工艺 在单因素实验基础上，考察温度(A),提 取时间(B),料液比(C)3个因素，每个因素3 个水平，进行正交实验？因素-水平表见表 1-1所示？ 齐墩果酸的分离纯化 酸碱沉降法：准确称取4gNaO圈体, 加入100ml水，配成1mol/ml的NaO厢液? 量取10ml浓硫酸，将其缓慢倒入90ml水中, 配成10嘛酸溶液？取一份回流供试样将其 旋转真空浓缩，浓缩成浸膏状物，回收乙醇， 浸膏状物质用1mol/lNaOH溶液煮40分钟， 趁热过滤，重复3次，合并滤液？用10祸酸溶 液调pH=1,沸水浴4小时,氯仿萃取？蒸偕回 收氯仿，得固体齐墩果酸用甲醇定容至 100ml? 氯仿萃取法：取一份回流