NY-T-1750-2009-甜菜丛根病的检验-酶联免疫法.pdfVIP

ICS 65．020 B16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY／T 甜菜丛根病的检验酶联免疫法 Determinationofrhizomaniain sugarbeet ELISAmethod 2009—04—23发布 中华人民共和国农业部发布 175卜2009 NY／T 刖 昌 本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归171。 本标准起草单位：农业部甜菜品质监督检验测试中心。 本标准主要起草人：马龙彪、吴玉梅、张福顺、王皙玮、张玉霜、李成玉。 1 1750--2009 NY／T 甜菜丛根病的检验酶联免疫法 1范围 本标准规定了甜菜丛根病的检验方法。 本标准适用于甜菜植株丛根病的检验。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括堪误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB／T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 甜菜丛根病rhizomania 由甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)侵染，以甜菜多黏菌(Polymyxabetae)为传播介体的一种土传病 害，致使甜菜块根外表形成不规则纤细根群，象胡须一样。 4原理 在测定时，把受检标本和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应，用洗 涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本 中受检物质的量有一定的比例，加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中 受检物质的量呈正比，根据颜色反应的深浅进行定性分析。 5试剂和材料 除非另有说明，本标准所用试剂，均指分析纯试剂；所使用的水符合GB／T6682中规定的三级水 规定。 51 0．5tool／I。盐酸溶液：取浓盐酸(Hcl)45mL用水定容至1000mL。 5．2 1．0％氢氧化钠(NaOH)溶液：称取1g氢氧化钠(NaOH)，用水定容至100mL。 5．3包被缓冲液(pH9．6)：分别准确称取无水碳酸钠(NazC03)1．59g，碳酸氢钠(NaHC03)2．93g，叠 氮化钠(NaN3)o．20 容至1000mL。 5．4 PBS磷酸缓冲液(pH7．4)：分别称取氯化钠(NaCl)8．0g，磷酸二氢钾(KH。P04)0．2g，磷酸氢二 钠(NaaHP04)1．15g，氯化钾(KCl)0．2g，叠氮化钠(NaN3)o．2g，然后在900mL水中溶解，用1．o％氢 000 氧化钠溶液(5．2)或0．5 mL。 tool／I。盐酸溶液(5．1)调节pH为7．4，用水定容至1 55