母体效价检测卡.docx

新生儿溶血病母体IgG抗体效价检测卡标准操作程序（SOP） 一、 准备工作 （一） 微柱凝胶检测卡的准备： 观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（ 18 - 25C） 平衡，再用专用离心机离心 5分钟。 （二） 试剂配制： 吸取2-Me14.7卩I,加pH7.2磷酸盐缓冲液至1ml为0.2M2-Me应用液；密封，避光，保存于 4C冰箱内，可使用 3个月。 （三） 标本采集： 抽取孕妇静脉血5ml, 一般为不抗凝血，无需空腹。同时，提供 3-4mI胎儿父亲的抗凝血， 对判断母子血型的配合与否是十分有益的。 （四） 红细胞标本的制备 ：用红细胞稀释液（或生理盐水）配制红细胞悬液，红细胞最终浓度为 0.8%。 （五） 血清/血浆标本的制备： 取同体积的血清/血浆和2-Me （ DTT ）混匀，密封试管口，37C水浴30~60分钟。 二、 操作步骤 在试管中加入 200ul母体血清/血浆和200ul 2-Me 应用液，混匀，密封试管口，置 37C水浴30—60 分钟，以充分破坏血清中的 IgM类抗体。 取6只干净试管，做好标记；第1管中加入处理后的血清 /血浆50ul和350ul生理盐水，混匀（为1:16 稀释）；第2-6管中依次加200ul的生理盐水和前一管中的血清 /血浆200ul，做倍比稀释。 将卡标记好，依次将倍比稀释后的相应 50ul血清/血浆分别加入标记孔中。 在所有孔中加入50ul父亲的0.8%红细胞悬液（或与父亲同型的 A型或B型0.8%红细胞悬液），测定孕 妇ABC血型系统IgG血型抗体；在所有孔中加入 50ul标准O型0.8%红细胞悬液，测定孕妇 ABO血型 系统以外IgG血型抗体。 加样后的检测卡，置 37C孵育器中孵育15分钟。 用专用离心机离心 5分钟（900rpm 2分钟，1500rpm 3分钟）,取出，判定结果。 结果判定：产生1+凝集的最高稀释度，其倒数即为效价 阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中。 阴性结果：红细胞完全沉降到胶底部，在凝胶管底部形成红细胞扣。 注：据文献报道卡式抗人球蛋白法测出的母体效价值比聚凝胺和抗人球蛋白试管法高出 1-2个滴度。 三、 注意事项 灭活母体血清中IgM时，必须将试管口密封，并经常摇晃试管，以保证灭活效果。同时用单克隆抗 A 或抗B作为对照，用来确认 2-Me是否有效。 为保证灭活效果，避免母体效价值偏高， 灭活前应将母体血清稀释至用父亲同型红细胞检测凝集强度为 4+的最高稀释倍数。 灭活后的母体血清用父亲同型红细胞检测（即反定型试验） 无凝集，证明IgM灭活比较完全，如出现凝 集，说明灭活不完全，需要重新灭活。或者体内有 IgG完全抗体，此种情况多见于 O型血母亲。 灭活时间不能超过 60分钟，灭活时间过长或 2-Me浓度过高可使血清蛋白变性呈胶冻状。 为保证倍比稀释的准确度，从高浓度向低浓度倍比稀释时要求每次移液后更换新的吸头。 父亲红细胞标本也可用与其同型的 A型或B型红细胞代替。 每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。 检测卡应放在18-25 C储存，如若长期放在 4C冰箱，建议每1-2个月取出，用专用离心机离心一次， 以防止干胶或产生气泡。 精品文档