2020-第3章 导数光谱.pptVIP

第3章 导数分光光度分析 浑浊样品 测定信号被强吸收信号所淹没的弱吸收 1955年Giese等提出改进分光光度计的信号处理系统,为处理分辨波长相近的谱线,将透光强度对波长进行一次微分,可以得到不同高度,半宽度和间距不同的导数光谱图. 1956年 Collier 等用电学方法获得了信息强度对时间的一阶和二阶导数之后,设计了各种导数装置。 一.导数分光光度法的基本原理 I0,I分别为入射光强度和透射光强度,?为摩尔吸光系数,b为吸收池厚度,C为待测组分浓度. 一次微分 从上式可知,I和?是波长的函数,I的一阶导数值与浓度呈线性关系,灵敏度(一阶导数值的大小)决定于摩尔吸光系数对波长的变化率 最大时,灵敏度最大. 结论 二次微分 当 时,I的二阶导数值与浓度呈线性关系 结论 三次微分 当 时, I的三阶导数值与浓度呈线性关系 结论 四次微分 当 时, I的四阶导数值与浓度呈线性关系 结论 具有导数光谱测量装置的分光光度计,一般将信号作对数转换,用吸光度进行微分处理,即 A的n阶导数值始终与待测组分的浓度成正比,且在n阶导数值最大时,灵敏度最大. dA/d?=(dA/dt)/(d?/dt) 二.获得导数光谱的方法 （1）.电子微分 这种模拟微分电路的特点： (1) .在微分过程申，在实现信号微分的同时也实现信号的放大，从而显著地提高了测量灵敏度，灵敏度提高2-3个数量级。 (2).微分电路的放大与输入信号的频率有关，通过选择不同的放大倍数，可提高分析选择性，消除低频背景干扰。 (3).导数值与待测组分浓度成线性关系，可用于定量分析· (4).将n个模拟微分电路串联起来，就能得到n阶导数光谱,将一般自动记录式分光光度计的主机、记录仪及模拟微分电路加以组合，容易实现高阶微分，装置比较简单便宜。 根据导数的定义, 在实际工作中,Δ?不可能接近于0,而是一个有限的正整数,因此,在计算机中导数的测量转化为离散的差分形式: 2）.数值微分法 ?为调制频率.t为时间 ?1处用泰勒级数展开得到强度分布, 如果对含有ω t, 2?t,3?t???的成份进行检波，即可获得一阶，二阶，三阶??? ???导数信号。 (3).波长调制法 Omega ?： 根据需要, 预先使两个单色器的波长差Δ?= ?2- ?1,固定在Δ?足够小(只有1-2nm),可视为ΔA/Δ?=dA/d?,若在扫描时保持Δ?为常数c,即dA/d?=ΔA/c. 因此,即可沿吸收曲线连续记录恒定波长间隔所产生的吸光度差来获得导数曲线. （4）.双波长扫描法 400 450 500/nm ΔAmax 0 一阶导数曲线的零点对应于吸收曲线的吸收峰 一阶导数曲线的零点对应于吸收曲线的吸收峰 一阶导数曲线和吸收曲线的比较 三.吸收光谱与导数光谱的峰和谷的关系 左图给出了吸收光谱和相应的一至四阶导数光谱，这些导数光谱具有以下特征： (1).零阶曲线的极大处，相应于奇阶导数(n=1，3，5???)曲线零点; 零阶曲线的拐点处，相应于奇阶导数曲线的极大或极小，这有助于精确确定吸收峰的位置和肩的存在。 吸收光谱与导数光谱的峰和谷的关系（a.吸收光谱，b-e.一至四阶导数光谱） 零阶曲线极大处 零阶曲线拐点 0 1 2 3 4 (2).偶阶导数(n=2,4 ???)曲线的形状与零阶曲线较为相似，零阶曲线的极大处相应于偶阶导数曲线的极大或极小; 零阶曲线的拐点相应于偶阶导数曲线通过零点。 零阶曲线极大处 零阶曲线拐点 0 1 2 3 4 (3).谱带的极值数随导数阶数的增加而增加，一个吸收带经过n次求导后,产生 的极值(包括极大和极小)数为n十 1个。 (4).在导数曲线中,随着求导阶次的增加,谱带变锐,带宽变窄,二阶导数曲线的半宽度仅为零阶曲线半宽度的1/3; 四阶导数曲线仅为零阶曲线半宽度的1/5。 0 4 3 2 1 极值数 5 1 5 2 3 4 峰数 1 2 3 4 微分次数 （1）.切线法 对相邻两峰 (谷)作切线，测量两峰间的谷(峰)至切线间的距离(图中的b 线). 此法适合于有线性背景的情况，只要基线平直，不论其是否倾斜，都能得到正确的结果。 四.导数光谱的测量方法 (2).峰-峰法 通过测量相邻峰谷间的距离（正峰和负峰之和）来进行定量分析 (图 中的a或 c线)，这是最常用的方法，灵敏度高。 (