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菌种的分离与培养 在自然界里，食用菌都不是单独存在的，而是和许多细 菌、放射菌、霉菌等生活在一起的。所谓菌种分离，就是把 这些和食用菌一起生活的杂菌分离出来，通过培养，获得纯 的优良菌种。菌种分母种、原种、栽培种。 (一)母种的分离培养 食用菌母种的分离，可分为抱子分离法、组织分离法以及 基内菌丝分离等。 抱子分离法 抱子分离法，是用食用菌的有性抱子或无性抱子萌发成菌 丝，培养成菌种的方法。这种菌种生活力较强，但抱子个体 之间有差异，且自然分化现象较严重，变异大，需经出菇试 验才能在生产上应用。 单抱分离法：是每次或每支试管只取一个担抱子， 让 它萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法。蘑菇和草菇用单抱分 离得到的菌丝，有结实能力，可采用此法分离生产纯菌种。 单抱分离生产上较少采用，而且技术复杂，一般采用多抱分 离法。 多抱分离法：就是把许多抱子接种在同一培养基上， 让它们萌发、自由交配来获得食用菌纯菌种的一种方法。具 体操作方法，有以下几种： 种菇抱子弹射法： 选择个体健壮、朵形圆正，无病虫害、 出菇均匀、高产稳产，适应性强的八九分成熟的种菇，切去 大部分，菌柄用无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的纱布或脱脂 棉、滤纸吸干表面水分。在接种箱或无菌室内，把种菇的菌 褶朝下用铁丝倒挂在玻璃漏斗下面，漏斗倒盖在培养皿上面； 上端小孔用棉花塞住。培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上， 静置12?20小时，菌褶上的抱子就会散落在培养皿内。形 成一层粉末状抱子印（平菇极淡紫色，蘑菇、草菇 为褐色， 香菇、金针菇抱子印白色）。用接种针沾取少虽抱子在试管 中的琼脂外面或培养皿上划线接种。待抱子萌发，生成菌落 时，选抱子萌发早、长势好的菌落进行试管培养。 还可用抱子采集器收集抱子。方法是选好种菇后，按上述程 序，轻轻掀开玻璃钟罩，将种菇柄朝下插在抱子采收器的钢 丝架上，放在培养皿正中央。随即盖好玻璃罩，用纱布将钟 掌周围塞好。并在纱布上倒少许升汞或无菌水。移入 20 C 左右恒温箱培养。 褶上涂抹法：按无菌操作分离时；应选择成熟的种菇， 用接种针直接插入褶片之间，轻轻抹取褶片表面子实体尚未 弹射的抱子，再在培养基上划线接种。 钩悬法：取成熟菌盖的几片菌褶或一小块耳片 （黑木耳、 毛木耳、白木耳〕，用无菌不锈钢丝（或铁丝、棉线等其他 悬挂材料）悬挂于三角瓶内的培养基的上方，勿使接触到培 养基或四周瓶壁。置适宜温度下培养、转接即可。 贴附法：按无菌操作将成熟的菌褶或耳片取一小块， 用 溶化的琼脂培养基或阿拉伯胶、浆糊等贴附在配管斜面培养 基正上方的试管壁上。经 6?12小时的培养，待抱子落在斜 面上，立即把抱子连同部分琼脂培养基移植到新的试管中培 养即可。 抱子分离得到的母种、必须进一步提纯复壮，当母种定植一 星期左右，菌丝布满斜面时，选择菌丝健壮、生长旺盛无老 化、无感染杂茵的母种试管， 进而转管扩大，一般到栽培种， 转管不宜超过5次。 抱子分离得到的母种，必须通过出菇试验，鉴定为优质菌 种后，才可供生产使用。 一般菌类如蘑菇、平菇、凤尾菇、香菇、冬菇和草菇等， 都可用多抱分离法获得母种。 现就银耳抱子分离略述于下： 按无菌操作获取种耳后，悬挂种耳的三角瓶经 12小时培养 后，瓶底培养基表面就有’抱子印’。取出种耳，置20C — 25C 温箱培养2?3天，培养基表面会出现乳白色透明的糊状小 菌落，就是银耳的酵母状分生抱子形成的少虽银耳菌丝。此 时移接入试管斜面培养基上，待长满斜面后，再移接入营养 丰富，且表面比较干燥的培养基上。经 30天左右，菌落长 出白色菌丝。 银耳的酵母状分生抱子、菌丝只有与羽毛状菌丝的子盘菌 (香灰菌丝)混合培养时，由后者帮助分解木材及其他一些 纤维物质，提供营养，才能利于银耳抱子萌发，菌丝的定植 和子实体的形成。 在两种菌丝交会时，先选出两种纯菌丝。 羽毛状菌丝要纯化选育，一般要选取生长迅速，爬壁力强 的试管斜面或种瓶， 取先端菌丝，转管移接，置25C — 28C 上培养，重复转管几次即可得到优良纯种。 银耳菌丝的特点，菌丝生长缓慢，担抱子也不易萌发。在 进行两菌混合时，先取经 8?IO天培养的银耳菌丝斜面，按 无菌操作方法在该斜面上距银耳菌丝约 0.5厘米处接入一 小块羽毛状菌丝。置25C下培养1周即得到混合好的银耳母 种。 组织分离培养法 利用子实体内部组织，进行无性繁殖而获得母种的简便方法， 即组织分离。该法操作简便，菌丝生长发育快，品种特性易 保存下来，特别是杂交育种后，优良菌株用组织分离法能使 遗传特性稳定下来。常采用以下分离方法。 子实体分离：种菇要选朵大盖厚，柄短，八九分成熟 的优良品种。切去菇两基部，在无菌箱内以 0.1 %的升汞水 浸几分钟，再用无菌水冲洗并揩干或用 75 %酒精棉球擦拭菌 盖与菌柄2次，进行表面消毒