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视网膜病理结构改变 兴奋性氨基酸引起的兴奋毒性是糖尿 病视网膜病变〔1〕、青光眼、视网膜变性等 疾病的视网膜神经元损伤及死亡的主要机 制之一。体内研究表明，视网膜的兴奋毒性 主要由N甲基D天冬氨酸受体介导〔2〕。牛 磺酸是视网膜含量最丰富的游离氨基酸， 近 年来发现，牛磺酸可以保护培养的小脑颗粒 细胞对抗兴奋毒性损伤〔3〕。本实验通过在 大鼠玻璃体内注射 NMD/feJ备视网膜兴奋毒 性损伤模型，观察牛磺酸对 NMD麻导的视 网膜组织结构及超微结构损伤的保护作用。 1、材料与方法 11实验动物及视网膜NMDA4奋毒性损 伤动物模型的建立成年雄性 SpragueDawley 大鼠20只，体质量200?250g,实验动物质 量合格证号：SCXK2002008大鼠腹腔注射 速眠新注射液01ml/100g麻醉，5%￡品酰胺 散瞳，1%RJ多卡因进行角膜表面麻醉，用微 量注射器从颗上方巩膜距角膜缘外 3mmfc进 针，见针尖到达玻璃体中后部后，缓慢注入 5p l4mmol/L的NMDA2〕。洁霉素滴眼预防 感染。眼瞎大鼠弃去。 12实验分组20只大鼠按随机数字表法 分为4组：正常对照组；NMD舶；NMDA+ 磺酸干预组；磷酸盐缓冲液对照组；每组 5 只大鼠。正常对照组不进行任何处理； NMDA 组为上述模型组；牛磺酸干预组于眼内注射 NMDAT 1h及其后每天腹腔注射牛磺酸，共 注射3d; PBS对照组于玻璃体内注射 5 p l01mol/LPBS。玻璃体注射后第 4d观察 指标变化。NMDA牛磺酸，用无菌01mol/LPBS 稀释。 13视网膜组织病理学观察及视网膜厚 度测量腹腔注射2ml/100g03%戊巴比妥钠处 死大鼠，迅速摘取右眼，去除前节、晶状体 及玻璃体，将眼杯用10%鬲尔马林固定，常 规石蜡包埋，经视乳头切片，苏木精伊红染 色，观察视网膜组织结构并照相，LEICAQWIN 图像分析软件于距视乳头中心 15mntt双侧 测量视网膜全层及视见网膜内层厚度， 每只 眼球取6张切片，每组5只大鼠结果求平均 值。 14视网膜超微结构观察按前法处死大 鼠，摘取左眼，将眼杯迅速置于 4C预冷的 3诚二醛固定，常规1%车我酸固定，系列丙 酮脱水，环氧树脂浸透包埋，经光镜定位后 行超薄切片，于TENCAI10PHILIPS透射电镜 下观察视网膜各层细胞的超微结构。 15统计分析采用SPSS^计软件处理， 组间比较用单因素方差分析。 2、结果 21视网膜组织病理结构改变及视网膜 厚度测量 HE染色及视网膜厚度测量结果显示，玻 璃体内注射NMD侣第4d,与未注射眼视网 膜相比，视网膜总厚度变薄，尤以视网膜内 层厚度变薄明显，节细胞数有减少，而视网 膜内、外段及外核层改变不明显。牛磺酸干 预使视网膜总厚度及内网状层厚度较模型 组增厚，节细胞的丢失减少。表明牛磺酸干 预可有效保护NMDA4奋毒性对视网膜组织 病理结构改变。 22玻璃体注射NMD承牛磺酸干预对视 网膜超微结构的影响透射电镜观察发现， 玻 璃体注射NMD殆第4d,视网膜内核层细胞 及节细胞超微结构发生改变。镜下可见， NMD^:视细胞胞体无明显病变， 色素上皮 细胞及盘膜正常，内核层神经元线粒体中、 重度肿胀，崎消失甚至空泡样变，内质网严 重扩张，节细胞部分轴突明显肿胀，视神经 纤维明显肿胀甚至解体， 整个内核层神经元 及节细胞表现为变性改变。牛磺酸干预组： 内核层细胞有轻度线粒体肿胀及内质网扩 张，节细胞超微结构正常，仅部分节细胞见 轻度线粒体肿胀和内质网扩张， 视神经纤维 层轴突肿胀不明显，牛磺酸组超微结构改变 较NMDA!明显减轻。 NMDA!的内核层细胞 牛磺酸干预组的节细胞 NMDA!视神经纤维层 牛磺酸干预组视神经纤维层 3、讨论 目前认为EAA引起的兴奋毒性是糖尿病 视网膜病变、青光眼、视网膜缺氧等的视网 膜神经元死亡的主要机制之一。研究表明 〔2〕，视网膜内层神经元的兴奋毒性损伤主 要由对NMD庚体的过度刺激引起，NMD承 体的各亚单位在视网膜主要见于内网状层 的突触后神经元，即无足细胞和节细胞〔5〕。 Lam等〔6〕用玻璃体内注射 NMDA勺大鼠模 型发现，注射18h后内核层和节细胞层出现 大量细胞凋亡。腹腔注射 NMD质体拮抗剂 -MK801能有效预防NMDA寸视网膜细胞的损 伤〔7〕。将NMD度体拮抗剂用于预防视网 膜兴奋毒性是一种值得探索的方向， 但由于 NMD废体同时介导许多正常的生理功能， 其 拮抗剂用于人体可能对中枢神经系统产生 多种副作用，使其临床应用受到限制〔 8〕。 牛磺酸是一种正常存在于人体多种组织的 游离氨基酸，目前公认牛磺酸是一个调节及 降低神经细胞内Ca2咏平的强有力因子〔9〕 有研究提示，牛磺酸可通过防止或降低谷氨 酸诱导的胞内Ca2咏