GUS染色及GUS蛋白提取及GUS蛋白酶活性测定.docVIP

GUS染色及GUS蛋白提取及GUS酶活性测定 1.1 所用溶液 (1) 储存液（×10） 1M Tris-HCl (pH 7.0) 0.5M NaCl 0.1% (V/V) TritonX-100 5mM K3[Fe(CN)6] 5mM K4[Fe(CN)6] 0.1M EDTA 0.1%(V/V) 戊二醛 (2) 次级溶液(现用现配) 以配制 100mL 反应液为例，取上述的七种母液各 10mL，在容量瓶中用超纯水定容至 100mL，加入 104.1mg X-Gluc，溶解后即可用作染色。 (3) 配制 50%，75%，90%乙醇溶液，用于脱去叶绿素。 (4) 清洗液：0.1M Tris-HCl (pH 7.0) (5) 固定液：在 0.1M Tris-HCl (pH 7.0)中加入 1%的戊二醛。 1.2 操作步骤 (1) 切取烟草的根，茎，叶，花等不同的器官，放入 5ml 的塑料管中。 (2) 根据材料的体积加入染液，以完全浸没植物材料为宜。 (3) 抽真空 1-2min，以确保染液充分浸透。 (4) 用封口膜封上管口，以防染液蒸发。 (5) 37℃温育 3-4h，最长不超过 14h (6) 将植物材料从染液中取出，用 0.1M Tris-HCl (pH 7.0) 清洗三次。 (7) 去掉清洗液后，加入固定液，低温 15℃固定 1-2h (8) 弃去固定液，用 0.1M T