32 11DNA重组技术的基本工具课件.ppt

人教版选修 3 专题 1 基因工程 课题 1 DNA 重组技术的基本工具 定向基因改造设想 设想 一 设想 二 设想 三 能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮？ 能否让细菌“吐出”蚕丝？ 能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等 珍贵的药物？ 经过多年的努力，科学家于 20 世纪 70 年代创 立了可以定向改造生物的新技术 —— 基因工程。 （一）基因工程的概念 什么叫基因工程？ 基因工程又叫 基因拼接技术 或 DNA 重 组技术 。该技术是在 生物体外 ，通过对 DNA 分子进行人工“ 剪切 ”和“ 拼接 ”， 对生物的基因进行 改造 和 重新组合 ，然后 导入受体细胞 内进行无性繁殖，使重组基 因在受体细胞内 表达 ，产生出人类所需要 的 基因产物 。 基因工程的别名 基因拼接技术或 DNA 重组技术 操作环境 生物体外 基因 操作对象 操作水平 基本过程 结果 DNA 分子水平 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 人类需要的基因产物 ? 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 苏云金芽孢杆菌 提取 普通棉花 ( 无抗虫特性 ) 抗虫基因 形成 导入 重组 DNA 棉花细胞 ( 含抗虫基因 ) 棉花植株 ( 有抗虫特性 ) ? 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ ? 基因工程培育抗虫棉的关键步骤： 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌 细胞内提取出来 关键步骤二： 形成重组 DNA 关键步骤三： 重组 DNA 导入受体 ( 棉花 ) 细胞 （二） DNA 重组技术的基本工具 ? 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ 关键步骤一的工具： 分子手术刀 — 限制性内切酶 关键步骤二的工具： 分子缝合针 — DNA 连接酶 关键步骤三的工具： 分子运输车 — 运载体 一、 “分子手术刀” —— 限制性核酸内切酶 主要是从 原核生物中分离纯化出来 的一 1 、来源： 种酶。能将外来的 DNA 切断 ，由于这种 切割作用是在 DNA 分子内部进行的，故 名限制性内切酶。 2 、种类： 4000 种。 识别双链 DNA 分子的某种特定的核苷酸 3 、作用： 序列，并且使每一条链中 特定部位 的两 个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 粘性末端 平末端 4 、结果： 形成两种末端 什么叫黏性末端？ 大肠杆菌 (E.coli) 的一种限制酶 能识别 GAATTC 序列 ，并在 G 和 A 之间切开。 限制酶 “ 分子手术刀” —— 限制性核酸内切酶 限制 酶 ? 什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的 DNA 两条 单链的切口 ， 带有几个 伸出的核苷酸 ，他们之间正好 互补 配对 ，这样的切口叫 黏性末端 。 什么叫平末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开 时，切开的 DNA 两条单链的切口，是平整的， 这样的切口叫 平末端 。 限制性内切酶 1 、特点： 特异性，即识别特定核苷酸序列，在 特定的切点切割。 2 、分布： 主要在微生物中。 3 、结果： 产生黏性末端（碱基互补配对）、平 末端。 4 、举例： 大肠杆菌的一种限制酶（ EcoR Ⅰ ) 能 识别 GAATTC 序列，并在 G 和 A 之间切开形成黏性末 端， Sma Ⅰ 能识别 CCCGGG 序列，并在 C 和 G 之间 切割形成平末端 。 ? 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制 酶切几个切口？可产生几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端。 ? 如果把两种来源不同的 DNA 用同一种限制酶 来切割，会怎样呢？ 会产生 相同的黏性末端 ，然后让两者的黏性末 端 黏合 起来，就可以合成 重组的 DNA 分子 了。 ㈡ 基因操作的基本步骤 １、提取目的基因 —— 将 需要的基因从供体生物 的细胞内提取出来。 目前被较广泛提取 使用的目的基因有：苏 云金杆菌抗虫基因、人 胰岛素基因、人干扰素 基因、种子贮藏蛋白基 因、植物抗病基因等。 供体生物细胞 取出 DNA 用限制酶剪 去多余部分 限制酶 目的基因 ? “ 分子缝合针” —— DNA 连接酶 DNA 连接酶可把黏性末端之间的 缝隙 “缝合” 起来，是把梯子两边扶手的断口连 接起来，这样一个重