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泰山学者青年专家工作计划书 李雪梅 一、背景概述 （主要包括：所属研究领域、国内外发 展水平、申报人选在本领域内的研究基础等） 癌症等重大疾病是威胁人类生命健康的头号杀手。根据《 2012 中国肿瘤登记 年报》统计，全国肿瘤发病率为 285.91/10 万，每年新发肿瘤病例约 312 万例，平 均每天新增肿瘤病患 8550 人，即全国每 10秒钟就有 1 人被诊断为恶性肿瘤。按 目前的医疗水平，对癌症患者早期治疗的 5 年生存率可超过 80%，而对晚期癌症 患者，治疗后的 5 年生存率低于 10%。同时，恶性肿瘤是一种进行性发展的疾病， 某些重度的癌前病变可维持相当长的时间而不进展到早期癌或浸润癌。这一生物 学特征给予人们对肿瘤加以预防的机会，通过适当手段可阻滞、延缓肿瘤的发生。 因此，癌症的早期诊断与预警具有十分重要的意义。 由于早期肿瘤体积小，形态学特征很难确定，利用影像学进行早期诊断已成 为难以突破的瓶颈，也导致许多肿瘤错过早期发现和诊断的最佳时机而发展至中 晚期，或者在早期误诊为良性，到中晚期才予以确诊。大量研究与临床实践均表 明，实现癌症早期诊断和治疗的一个有效途径是特异性检测恶性肿瘤相关生物标 志物。近年来，由于高通量基因芯片筛查技术的运用，不少与肿瘤发生发展有关 的基因已被发现，这些基因大大加深了人们对肿瘤的理解，检测这些基因序列或 表达情况的改变，将有利于肿瘤的预警、早期发现和诊治，并日益成为临床医生 诊断肿瘤分型、提供治疗方案、分析预后的一种重要的辅助手段。随着分子病理 学的发展， DNA 、miRNA 等分子生物学标志物研究已引起高度关注。近年来的研 究表明， miRNA 与人类肿瘤的发生密切相关，其表达模式也与病人预后相关。而 且，除了组织和细胞中的 miRNA ，外周血 miRNA 的表达也表现为显著的肿瘤相 关性、组织特异性和表达稳定性。因而，利用 miRNA 在不同癌变组织与正常对照 之间存在显著表达差异，可以发现新的恶性肿瘤生物标志物；通过外周血中 miRNA 的检测，可以进行恶性肿瘤的预警与早期诊断。由于 miRNA 序列短，在 细胞内表达丰度低，同家族 miRNA 之间序列相似性强，灵敏、特异、高通量的 miRNA 分析方法的建立向相关生物 /化学研究人员提出了新的挑战。 目前检测 miRNA 的方法主要有 Northern 印迹分析，微点阵分析和实时定量 PCR。具有重复性差，耗时长，灵敏度低等缺点，不能满足肿瘤早期检测的需要。 因而，建立肿瘤标志物 miRNA 快速灵敏的检测方法，可为癌症的早期检测、早期 准确诊断与预警开辟新途径，并为揭示恶性肿瘤的发生与发展机制、靶向治疗和 创新性药物的开发提供理论依据与物质基础 [3]。表面等离子体共振光谱（ SPR）技 术是一种全新的生物化学分析方法 [4] ，与传统的生化分析方法相比，具有无需标 记、灵敏度高、检测准确、检测快速、能够实现在线实时连续检测等优点。特别 是近年来， SPR 分析方法在生命科学及生物分析研究领域显示了广泛的应用前景， SPR 生物传感器在肿瘤标志物检测方面的应用已经取得显著进展。但囿于早期检 测方法、原理及电子技术方法的限制，使得其灵敏度不够高，不能满足肿瘤早期 检测的需求。 超灵敏 SPR 传感器对于癌症早期诊断技术的发展有着极大的促进作 用， 因而亟需提高 SPR传感器的检测灵敏度。 DNA 分子因其结构特点和特有的分子间相互作用特性，尤其适合于作为自组 装的材料，通过化学键自发组合形成结构稳定、复杂有序且具有某种特定功能的 分子聚集体或超分子结构的过程。 DNA 自组装现已在 DNA 纳米技术这一广阔领 域大展身手 [21,22]。特别是 DNA 折纸术的发展，具有实验操作简单、流程化、反应 速度快、条件要求低等优点， 展现了 DNA 非凡的自组装能力 [23] 。然而，基于 DNA 自组装的信号放大过程与 SPR联用检测肿瘤标志物的文献未见报道。 本项目拟开展基于 DNA 自组装无酶信号放大的表面等离子体共振技术检测肿 瘤标志物 microRNA 的研究。利用 DNA 的自组装性质，将 DNA 聚环结构应用于 SPR生物传感器的研制，通过杂交链式反应等放大技术实现 miRNA 的高灵敏检测。 利用信号放大与高灵敏的检测技术结合，集成多种放大技术，提出 miRNA 与蛋 白质的信息传导新原理，为癌症的早期检测、早期诊断提供高选择性、高灵敏的 检测新方法。 申请人在生物化学分析方面有较好的基础，在国家自然科学基金的支持下， 已在 DNA 电化学生物传感器、核酸适体生物传感器、肿瘤标志物的光电分析、毛 细管电泳单细胞分析、微流控芯片单细胞分析的研究方面作了较多的工作。针对 恶性肿瘤等疾病早期检测方法操作复杂、价格昂贵、