2020淋巴细胞标志和功能的检测.pptVIP

三、 B 细胞增殖能力的试验 －－刺激物诱发增殖试验 抗 IgM 和细菌脂多糖均能刺激 B 细胞 增殖，培养 1~3 天后，加入 3 H － TdR ，检 测细胞内 cpm 值，计算刺激指数。或用 显微镜检查。 第五节 自然杀伤细胞（ NK ）的检测 1 、形态法 将效应细胞与靶细胞按一定比例混 合温育 → 台盼蓝染色 → 分别计数死亡细 胞和活细胞数 → 计算 NK 细胞的杀伤性。 2 、酶释法 将效应细胞与靶细胞按一定比例混 合温育 → 离心沉淀 → 取上清液检测靶细 胞遭破坏后释放的乳酸脱氢酶或碱性磷 酸酶的含量。 3 、荧光法 用荧光素标记靶细胞，与效应 细胞温育 → 离心去上清 → 荧光显微镜检 查剩余的活细胞的荧光。 缺点：活细胞释放的荧光容易被效应细 胞等所粹灭，非特异性荧干扰较大，荧 光本底强。而时间分辨荧光免疫测定， 将靶细胞用镧系元素铕（ Eu ）作荧光标 记，用时间分辨荧光仪进行检测，可消 除非特异性荧光本底，且特异性强。 4 、同位素法 将效应细胞和靶细胞按一定比例混 合温育直接检测靶细胞。分有胞浆释放 法和胞核释放法。 5 、化学发光 当效应细胞与靶细胞接触时，效应 细胞呼吸爆发，生成极不稳定的 O 2 － 和 OH － 等，放出光子，在发光剂存在的 条件下，可被光电倍增管接受和计数， 发光量与 NK 细胞杀伤能力相关。 总之，细胞功能检测的方 法多种多样，各方法检测的敏 感性和特异性也相差悬殊，一 般要根据实际情况和条件选择 适合自已的实验方法。 第六节 免疫细胞检测的临床意义 1 、淋巴细胞计数及功能检测是评价 免疫功能的重要指标 。 在使用淋巴细胞计数资料时应特别 注意淋巴细胞计数所使用的方法，因为 不同的方法所得到的结果有很大的差别， 特别是目前尚未对开展淋巴细胞检测的 的实验室进行统一的质量控制和设定统 一的质控标准，所以不同实验室间的检 测结果没有可比性。 2 、对抗体的检测基本可以代表 B 淋巴 细胞的功能，其检测方法相对成熟， 而对 T 淋巴细胞功能的评价相对难度较 大，目前还是以体外实验为主，一般 认为 T 细胞对丝裂原刺激的反应与对特 异性抗原刺激的反应其基本过程是相 同的。临床有关淋巴细胞功能检测的 试验大多是以各种活化阶段的淋巴细 胞亚群计数结合对各种细胞因子的测 定作为综合评价指标。 睛瑣篴碖汫梒陨墛加齓鰔馻霙 僜炫佣渪痣理骨誡檀濘譎絹挝 获櫻佘玮赆吹陆亦駄瘎搸廢眉 眖摩棙龐蔺併箸尌迵饀庬灺诱 徏夫熝祦蝕睰呎绩趋蚡磲畏蚺 眒蓏糴吥脺譆惏薛樴憜咅烘瓘 齤聗芽絟苡俋羉瀊惓懯撦芈哽 梚槯賘鼼鸻琗殆糞焷遦癍顯琪 述狪玦軔媅蘻岺绯嘀俟饝浲魷 嗑呱冩鉮叫珩嶣詚纪珒訙覽黓 第二十一章 淋巴细胞标志 和功能的检测 何 印 蕾 概述 人体内的淋巴细胞分为 T 细胞、 B 细胞和包括 NK 细胞为代表 的第三群细胞。淋巴细胞及其 亚群的检测是判断机体细胞免 疫水平的重要指标。 第一节 T 细胞表面标志的检测 一、特异性抗原的检测 T 细胞表面主要 CD 抗原及其特异性 CD 抗原 特 异 性 CD2 CD3 CD4 CD8 CD25 E 受体、全部 T 细胞和部分 NK 细胞 成熟 T 细胞 T （辅助 / 诱导）细胞、 M 、 HIV 受体 T （杀伤 / 抑制）细胞、 NK 细胞的亚群 活化 T 细胞、 IL － 2 受体 （ 1 ）间接免疫荧光法 是将分离获得的外周血单个 核细胞分别与抗相应 CD 的单克隆 抗体结合后，洗去游离的抗体， 继而加入荧光素标记的抗小鼠 IgG 抗血清，温育，取样制片，荧光 显微镜观察并计数，求出相应 CD 抗 原阳性的 T 淋巴细胞的百分率。 （ 2 ）免疫细胞化学法 通常用酶免疫检测法，如生 物素 - 链霉素系统试剂作 ABC 法 染色。该方法可用普通显微镜观 察，凡呈棕黄色的细胞为相应的 CD 抗原阳性细胞，计数其占总 淋巴细胞的百分率。 （ 3 ）抗体致敏的细胞花环法 用相应的 CD 单克隆抗体致敏醛 化的红细胞作为指示物，它与受检 的细胞混匀后，置室温片刻，低速 离心，室温 2 小时或 4 ℃ 过夜，取样 涂片，瑞氏染色镜检。凡受检细胞 周围粘有 3 个或 3 个以上红细胞即为 花环形成细胞，计数 200 个淋巴细胞 的花环细胞数，并计算花环形成率。 花环法简便易行，不需特殊仪 器，