2020第七章细胞融合及应用.pptVIP

只针对某一抗原决定簇的抗体分子称为单克隆抗体 。 T 淋巴细胞 ：即胸腺依赖淋巴细胞（ thymus dependent lymphocyte ）。亦可简 称 T 细胞。来源于骨髓的多能干细胞（胚胎期则来源于卵黄囊和肝）。目前认 为，在人体胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干细胞或前 T 细胞迁移到胸 腺内，在胸腺激素的诱导下分化成熟，成为具有免疫活性的 T 细胞。成熟的 T 细胞经血流分布至外周免疫器官的胸腺依赖区定居，并可经淋巴管、外周血 和组织液等进行再循环，发挥细胞免疫及免疫调节等功能。 T 细胞的再循环有 利于广泛接触进入体内的抗原物质，加强免疫应答，较长期保持免疫记忆。 T 细胞的细胞膜上有许多不同的标志，主要是表面抗原和表面受体。这些表面 标志都是结合在细胞膜上的巨蛋白分子。 人类免疫系统的介绍 外分泌淋巴系统：呼吸道和生殖泌尿系统 内分泌淋巴系统：胸腺、骨髓、脾脏、扁桃体、淋巴结等 B 淋巴细胞 ：来源于骨髓的多能干细胞。在禽类是在法氏囊内发育生成，故 又称囊依赖淋巴细胞（ bursa dependent lymphocyte ） / 骨髓依赖性淋巴细胞 简称 B 细胞，是由骨髓中的造血干细胞分化发育而来。与 T 淋巴细胞相比， 它的体积略大。这种淋巴细胞受抗原刺激后，会增殖分化出大量浆细胞。 浆细胞可合成和分泌抗体并在血液中循环。成熟的 B 细胞经外周血迁出，进 入脾脏、淋巴结，主要分布于脾小结、脾索及淋巴小结、淋巴索及消化道 粘膜下的淋巴小结中，受抗原刺激后，分化增殖为浆细胞，合成抗体，发 挥体液免疫的功能。 B 细胞在骨髓和集合淋巴结中的数量较 T 细胞多，在血 液和淋巴结中的数量比 T 细胞少，在胸导管中则更少，仅少数参加再循环。 B 细胞的细胞膜上有许多不同的标志，主要是表面抗原及表面受体。这些表 面标志都是结合在细胞膜上的巨蛋白分子。 B1 细胞为 T 细胞非依赖性细胞。 B2 为 T 细胞依赖性细胞。 B 细胞在体内 存活的时间较短，仅数天至数周，但其记忆细胞在体内可长期存在。 B 细胞淋巴瘤是一种最常见的淋巴细胞白血病，有关这种疾病的研究 不断涌现。 单克隆抗体技术的核心是用骨髓瘤细胞 (myeloma cell) 与经 特定抗原免疫刺激的 B 淋巴细胞 (antigen stimulated B lymphoblast) 融合得到杂交瘤细胞 (hybridoma cell) ，杂交瘤细 胞既能象骨髓瘤细胞那样在体外无限增殖，又具有 B 淋巴细胞 产生特异性抗体的能力。因此，单克隆抗体技术又称为杂交 瘤技术 (hybridoma technology ）。 Niels K. Jerne G. Kohler C. Milstein 免疫网络学说 单克隆抗体： 1984 Nobel 二、杂交瘤技术的基本原理 三、杂交瘤细胞的制备 （一）骨髓瘤细胞选择及选择性培养基 ? 骨髓瘤细胞本身不能分泌抗体 ? 选择次黄嘌呤鸟嘌呤转磷酸核糖激酶缺陷型 （ HGPRT- ） ? 胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型（ TK- ） HAT 培养基 次黄嘌呤（ hypoxanthine ， H ） 氨基喋呤（ aminopterin ， A ） 胸腺嘧啶脱氧核苷（ thymidine ， T ） 次黄嘌呤鸟嘌呤转磷酸核糖激酶缺陷型 （ HGPRT- ） 胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型（ TK- ） （二）免疫小鼠 免疫程序是取 6 — 8 周龄 Balb ／ C 雌鼠，基础免疫 2 周， 静脉再加强免疫一次， 3 — 5 天后用于融合。免疫时是否采 用佐剂和事先处理抗原，要依抗原性的强弱而定。一般来 讲可溶性抗原用完全佐剂效果较好。抗原量同样与抗原强 弱有关，以 IgG 为例，第一次为 l00 ? g ，第二次为 50 ? g ，免 疫途径第一次可经腹腔注射。对于细胞性抗原不用佐剂， 每次腹腔注射 1 × l0 6 一 1 × 10 7 。 （三）脾细胞的制备 (1) 引颈处死小鼠，用酒精消毒体表； (2) 无菌条件下取出脾脏，剃除结缔组织和脂肪，用 5ml 无血清 培养液冲洗一次； (3) 把脾脏置于已消毒的 90 一 100 目不锈钢网或尼龙纱网中； (4) 在脾中部切开一小口，用注射器芯从一端轻轻压挤，再用 无血清培养液冲洗，令细胞通过纱网，收集入平皿中，或用注 射器向脾脏内注入 3ml 无血清培养液，反复抽吸数次方法获取 细胞，再制成细胞悬液亦可； (5) 把细胞悬液注入 50ml 离心管中，加 l0 一 20ml 培养