2020第二十二二十三章免疫学的临床应用.pptVIP

免疫学的临床应用 陈水亲 生化与分子生物学教研室 第二十二章 免疫学检测技术 第一节 体外抗原抗体结合反应的特点及影响因素 一、抗原抗体反应特点 1 ．高度特异性 由抗原表位与抗体分子中的超变区互补结合所决定的。 2 ．表面化学基团之间的可逆结合 3 ．适宜的抗原抗体浓度和比例 抗原抗体结合后能否出现肉眼可见的反应取决于两者适当的浓度 和比例。 4 ．抗原抗体反应的两个阶段 二、抗原抗体反应的影响因素 1 ．电解质 抗原、抗体通常为蛋白质分子，等电点分别为 pH3~5 和 5~6 不等 。 实验中常用 0.85% 的 NaCl 溶液，以提供适当浓度的电解质。 2 ．温度 适当提高反应的温度可增加抗原与抗体分子的碰撞机会，加速抗 原抗体复合物的形成。通常 37 ℃是抗原抗体反应的最适温度。 3 ．酸碱度 抗原抗体反应的最适 pH 在 6~8 之间， pH 过高或过低，均可直接影 响抗原、抗体的理化性质。 第二十二章 免疫学检测技术 第二节 检测抗原或抗体的体外试验 一、凝集反应 （ agglutination reactions ） 细菌、细胞等颗粒性抗原或表面包被抗原的颗粒状物质（如聚苯 乙稀乳胶等）与相应的抗体在电解质存在的条件下结合，出现肉眼可 见的凝集团现象。 1. 直接凝集反应： 颗粒性抗原本身直接与相应的抗体反应出现的凝集 现象，如红细胞凝集或细菌凝集。 2. 间接凝集反应： 将可溶性抗原或抗体先吸附在某些颗粒载体上，形 成致敏颗粒，然后再与相应抗体或抗原进行反应产生的凝集现象 。 直接凝集反应和间接凝集反应亦常用于溶血性疾病的诊断，如 Rh 血型不符的新生儿溶血症及药物相关的溶血性疾病。 第二十二章 免疫学检测技术 二、沉淀反应（ precipitation reactions ） 毒素、组织浸液及血清中的蛋白等可溶性抗原与相应抗体反应后， 出现肉眼可见的沉淀物 。 1. 免疫比浊法 利用抗原抗体复合物在液相中形成浊度来测定抗原含 量的方法。 2. 单向琼脂扩散 常用于血清中免 疫球蛋白（ IgG 、 IgA 、 IgM ）、 C3 、 AFP 等定 量测定。 第二十二章 免疫学检测技术 3. 双向琼脂扩散 ①检测可溶性抗 原或抗体 ②对复杂的抗原 或抗体成分进行 纯度鉴定 ③免疫血清效价 测定 第二十二章 免疫学检测技术 4. 免疫电泳 常 用 于 血 清 蛋 白 的 组 分 分 析 第二十二章 免疫学检测技术 三、免疫标记技术（ immunolabeling technique ） 将抗原抗体反应与标记技术相结合，以检测抗原或抗体的一类试验方法。 常用的标记物有酶、荧光素、放射性核素、胶体金及化学发光物质等。 1. 免疫酶测定法（ EIA ） 这是一种用酶标记一抗或二抗检测特异性抗 原或抗体的方法。 ①双抗体夹心法 ②间接 EILSA 第二十二章 免疫学检测技术 血清检测中： 肝癌、骨肉瘤 ----- 血清 碱性 磷酸酶（ ALP ）升高。 前列癌 ------- 血清 酸性 磷酸酶升高。 2. 免疫荧光技术 是用荧光素标记一抗或二抗，检测特异性抗原或 抗体的方法。 1 2 3. 放射免疫测定法 是用放射性核素标记抗原或抗体进行的免疫测定。 敏感性可达到 pg/ml 水平，常用的放射性核素有 131 I 和 125 I 等。 第二十二章 免疫学检测技术 于 1977 年因创建 放射免疫测定法 而获得医学诺贝尔奖。 最敏感 4. 化学发光免疫技术 是将化学发光分析和免疫反应相结合而建 立的一种新的免疫分析技术。 5. 免疫胶体金技术 用胶体金颗粒标记抗体或抗原，以检测未 知抗原或抗体的方法称免疫胶体金技术。 四、蛋白质芯片技术 是指固定于支持介质 上的大量蛋白质构成 的微阵列。 6. 免疫印迹技术又称 Western blotting 第二十二章 免疫学检测技术 蛋白定性定量应用最广泛 第三节 免疫细胞功能的检测 一、免疫细胞的分离 1. 外 周 血 单 个 核 细 胞 的 分 离 第二十二章 免疫学检测技术 2. 淋巴细胞及其亚群的分离和分析