人类免疫缺陷病毒抗体测定标准操作规程.docxVIP

滁州市第一人民医院（南区）检验科 第1页共5页 标准操作规程 文件编号： CZYY-NQ-JYK-SOP-MY-008 版本： 1 滁州市第一人民医院（南区）检验科 标准操作规程 项目 方法  人类免疫缺陷病毒抗体测定 （双抗原夹心法） 文件编号 版本  CZYY-NQ-JYK-SOP-MY-008 第 1 版 编写者：郑昕本规程自 2016 复审人：  年  审核者：陶良萍 批准者：谢瑞玉 11 月 1日起实施，每 3年复审一次 复审日期：  批 准 日期 ：文件分发部门和/或个人： 医务科保管者 院长办公室保管者 院档案室保管者 检验科主任 临床免疫室  √ 规程修订记录： 修订 号  修订内容  修 订人  修订日期 滁州市第一人民医院（南区）检验科 第2页共5页 标准操作规程 文件编号： CZYY-NQ-JYK-SOP-MY-008 版本： 1 原 理 采用双抗原夹心两步法检测人血清或血浆中的 HIV1/HIV2 型抗体。在微孔板预包被基因重组 HIV(1+2) 型抗原，当加入的待测样本中存在 HIV 抗体时，将反应形成抗原抗体复合物，再与加入的酶标记基因工程 HIV(1+2) 型抗原反应，最后形成“固相 HIV 抗原-HIV 抗体-酶标记 HIV 抗原”的免疫复合物，加入底物后形成显色反应。 2.样品要求 2.1 病人准备事项 准备事项 具体内容 禁食 / 特种饮食 不要求禁食，但由于重度脂血可能干扰检测， 禁食样品最佳。 病人的准备事项 安静状态下抽取静脉血， 样品采集特殊要求 采血时应一针见血，切忌反复穿刺，避免溶血 2.2 样品类型及处理方法 样品类型 血清或肝素、枸橼酸钠、 EDTA抗凝血浆 最佳量 5ml 样品量 3ml 最少量 收集容器 肝素抗凝管（绿帽） 运输要求 室温 室温 2 小时 稳定性及储藏要求 冷藏温度（ 2-8 ?C） 4 天 -20 C 1 月 -70 C 6 月 标本制备 4000 转/ 分离心 5 分钟制备血清 / 血浆 拒绝采集量不足、肉眼观察有溶血及抗凝剂类型不符的样 标本拒收 品 试剂 名称 规格 储存条件 有效期 滁州市第一人民医院（南区）检验科 第3页共5页 标准操作规程 文件编号： CZYY-NQ-JYK-SOP-MY-008 版本： 1 HIV 预包被微孔板 （包被基因工程 HIV 96 人份 2℃～8℃避光保存 12个月 抗 原 ） HIV 酶标抗原 （含 HRP标记基因工 程 HIV 抗原） HIV-1 型阳性对照 （ 含 HIV-1 型抗体） HIV-2 型阳性对照 （ 含 HIV-2 型抗体） HIV 抗体阴性对照 （正常人血清） 浓缩洗涤液 PBS-T 缓冲液） 底 物 A( 含 H2O2) 底物 B（含 TMB） 终止液（含 H2SO4）  1支 2℃～8℃避光保存 12个月 1支 2℃～8℃避光保存 12 个月 1支 2℃～8℃避光保存 12 个月 1支 2℃～8℃避光保存 12 个月 2瓶 2℃～8℃避光保存 12 个月 1 支 2℃～8℃避光保存 12个月 1 支 2℃～8℃避光保存 12个月 1 支 2℃～8℃避光保存 12个月 4.仪器 名称 厂家 型号 全自动酶标分析仪 北京天石 SM-3 方法性能 5.1 特异性：阴、阳性参考品检出情况符合要求。 5.2 灵敏度：各亚型的最低检出量符合要求。 5.3 精密性：检测精密性参考品， CV≦15%（N=10）。 5.4 稳定性：试剂盒内各组分，37℃放置 6天，产品性能仍符合 1-3 项标准。 质量控制 6.1 设置阴、阳对照 6.2 失控规则：阴性对照 OD均值0.1 或者阳性对照 OD均值≦0.6 滁州市第一人民医院（南区）检验科 第4页共5页 标准操作规程 文件编号： CZYY-NQ-JYK-SOP-MY-008 版本： 1 操作步骤 7.1 平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温，微孔板开封后，余者即时以自封袋封存。 7.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀，浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按 1:19 稀释后使用。 7.3 编号：取所需数量微孔条固定于支架，按顺序编号。 7.4 加样 ：分 别在 相应 孔中 加 入 50ul 阴、 阳性 对 照血 清和 待测 样本 50ul 。 7.5 温育：封板后，置 37℃温育 60 分钟。 7.6 洗涤：用洗涤液充分洗涤 5次，洗涤后扣干。 7.7 加酶 ：分 别在 每孔 中加 入 酶标 记抗 体 100ul 。 7.8 温育：封板后，置 37℃温育 30 分钟。 7.7 洗涤：用洗涤液充分洗涤 5次，洗涤后扣干。 7.8 显色 ：每 孔加 入底 物 A、 B 各 50ul ， 混匀 ，置 37 ℃