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细胞遗传学技术 一、培养基 1 、外周血淋巴细胞染色体制备培养基 配制 新生小牛血清 20% RPMI1640 基本培养基 80% 植物血球凝集素（ PHA) 按说明配置 2 、绒毛、羊水细胞培养基配置 胎牛血清 20% 1640 、 HamF10 培养基原液 80% 二、细胞培养方法 1 、人外周血淋巴细胞染色体制备 1 ）方法 静脉血 0.3/5ml 培养基 37 ℃培养 72 小时 收细胞前 2-3 小时加秋水仙素 制片，染色 2 ）特点 取材方便、方法稳定、易掌握和推广 3 ）意义 检查该个体体细胞核型 2 、羊水细胞染色体制备 羊水细胞主要来自胎儿皮肤、胃肠道、 呼吸道、泌尿生殖道的粘膜上皮。 1 ）方法：培养 15 天左右 2 ）特点： （ 1 ）孕期为 16-20 周取材， B 超监测 取材，专人操作。 （ 2 ）培养 15 天左右 （ 3 ）方法复杂、设备较昂贵、成功 率较低。 3 ）安全性： 流产率约 1% 左右 4) 意义：检测胎儿核型 3 、绒毛细胞染色体制备 绒毛为受精卵经有丝分裂衍生出来的 胎儿附属结构 1 ）方法：直接法 培养法：短期和长期培养 2 ）特点： （ 1 ）孕 8-10 周取材， B 超检测，严格 无菌，专人操作。 （ 2 ）培养 15 天左右或直接制片 （ 3 ）直接法较为简单，可避免母体污 染，但染色体形态较差，分裂期细胞少。 3 ）安全性： 流产率约 2-4% 4 ）意义： 检测胎儿核型，进行早期诊断。 4 、骨髓细胞染色体制备技术 直接法或培养法 意义： （ 1 ）血液病的染色体异常检测 （ 2 ）骨髓细胞染色体畸变作为遗传 物质受损检测指标较为灵敏。 三、染色体显带技术 1 、 Q 显带 1 ）特点： 荧光染料染色 1 、 9 、 16 号染色体着丝粒区和 Y 染 色体长臂部分区域荧光明显 2 ）优点：带纹清晰 3) 缺点 : 试剂仪器价高 , 带纹易退色 2 、 G 显带 1 ）特点： 胰酶处理、 Giemsa 染色、带纹与 Q 带相似 2 ）优点： 制作方便、费用低廉、标本易保存 3 ）缺点： 带纹不及 Q 显带清晰 3 、 C 显带 着丝粒区深染 确定着丝粒数目和位置 1 、 9 、 16 着丝粒区深染而大 Y 染色体长臂部分深染 四、荧光原位杂交技术 fluorescence in-situ hybridization, FISH 1 、基本原理 指利用已进行荧光标记的探针与细胞、 组织切片上的核酸进行杂交，检测特异序列 的 DNA 或 RNA 。 它是在细胞遗传学、分子遗传学和免疫 学相结合的基础上发展起来的一项技术。 2 、探针标记的方法 直接法进行标记 间接法进行标记 3 、 FISH 技术的特点 ①操作操作简便 , 探针标记后稳定 , 一次标记后可 使用二年 . ②方法敏感 , 能迅速得到结果 . ③在同一标本上 , 可同时检测几种不同探针 . ④不仅可用于分裂期细胞染色体数量或结构变化 的研究 , 而且还可用于间期细胞的染色体数量及基因 改变的研究 . 4 、 FISH 在细胞遗传学中的应用 （ 1 ）重复序列的探针（卫星 (satellite) 探针） α 卫星 DNA 探针主要检测人染色体的着丝粒 β 卫星 DNA 位于端着丝粒染色体及各号染色体的 异染色体质周围 经典卫