2020茎尖分生组织培养.pptVIP

4 茎尖分生组织培养 一、概念和意义 1. 概念 茎尖分生组织培养 ：指对不超过 0.1mm 的茎 尖或几十微米的茎尖进行的培养。 特点：可获无病毒苗，操作困难，成苗时间 长。 普通茎尖培养：对几毫米至几十毫米长的茎 尖、芽尖及侧芽的培养。操作技术简单、 易成活、成苗时间短、繁殖速度快。 2. 意义 茎尖培养在园艺植物离体培养中最常见，可 快速繁殖无性系、 培养无病毒苗 、品种改 良。 二、茎尖分生组织培养一般方法 1. 材料的制备 健壮枝梢 去除叶片 分成 1-2cm 自来水冲洗 消毒 75% 的酒精 30 秒 0.1% 升汞或 20 倍 次氯酸钠消毒 8-10min 无菌水 修剪剥离茎 尖，通常切割下顶端 0.2~0.5 mm 叶原基的 茎尖（无菌水） 接种。 2. 培养基 多为 MS 培养基及其改良配方，还有 White 、 B5 、 Heller 、 Gautheret 等。 3. 培养条件 （ 1 ）温度：26℃ ~ 28℃ （ 2 ）光照：光培养的效果通常比暗培养好。 （ 3 ）湿度：与其他器官培养相似。 4.3 脱毒苗的培育和病毒检测 一、 脱毒苗的培育 （一）脱毒苗培育的意义 全世界已发现植物病毒有近 700 种，植物病毒 病严重地影响果树、蔬菜、花卉、林木等 植物的生长，造成产量降低，品质变劣， 其危害仅次于真菌病害。受病毒浸染的植 物终身带毒，目前尚无药物可以治愈。通 过茎尖分生组织脱毒、热处理脱毒等方法 可脱除植物体内病毒，恢复植物原有特性 。 （二）热处理脱毒 1. 原理 热处理脱毒又叫热温处理或热疗法。其基本 原理是一些病毒对热不稳定，在高于常温 的温度下（ 35-40 度）既钝化失活。 2. 热处理法有：温汤处理（热水浸泡）和热 风处理两种。 ? 具体方法： ? 第一，热水浸泡处理，适用于切下的材料， 在 50 度左右的温水中浸渍数分钟至数小时， 方法简便易行但材料易受伤。 ? 第二，热风处理，将生长的盆栽植物移入 室内或生长箱内，处理温度因植物种类、 生理状况而异。一般为 35~40 度，短则几十 分钟，长达数月。 （三）茎尖培养脱毒 1. 茎尖培养脱毒的原理 （ 1 ）病毒在植物体内的分布 病毒浓度不同，离尖端越远病毒浓度越高。茎尖或 根尖离体培养便可获得无病毒再生植株。 ? 必须指出的是，所谓无病毒，只是相对的，不是 绝对的。 （ 2 ）茎尖大小与脱毒 茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。茎尖分生组 织不能合成自身需要，生长素，细胞分裂素，因 而带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。因此茎尖 越大培养成活率越高。因此对不同植物脱毒适宜 的茎尖大小不同。 2. 茎尖培养脱毒的方法 （ 1 ）取样与消毒 可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种。 采顶芽与侧芽消毒接种。 消毒方法是：剪取顶芽梢段 3 、 5 厘米，剥去 大叶片，用自来水冲洗干净，在 75% 酒精 中浸泡 30 秒左右，用 1%-3 次氯酸钠或 5%- 7% 的漂白粉溶液消毒 10-20 分，最后用无 菌水冲洗材料 4-5 次。 （ 2 ）接种 材料置 10 ～ 40 倍的双筒解剖镜下，解 剖刀切取 0.1 ～ 0.3mm 带有 1 ～ 2 个叶 原基的茎尖，接种到培养基上。 （ 3 ）培养 接种后材料置 25+ 2℃ ，光照度 1500-5000LX ，每日 光照 10-16h 条件下培养。但一般光照培养比暗培 养效果好。其间应更换新鲜培养基。提高培养基 中 BA 的浓度可形成大量从生芽。 3. 培养基与培养方式 ： （ 1 ）培养基：常用 MS ， White 等培养基。 （ 2 ）培养方式：茎尖培养一般采用半固体培 养基 （四）、其他脱毒方法 1. 热处理结合茎尖培养脱毒 2. 微体嫁接脱毒 微尖嫁接技术（ micrografting shoot-tip ），指在 人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖 （ 0.14-1.0mm, 带 3-4 个叶愿基）以培养脱毒苗的技 术 。 主要脱毒程序是：无菌砧木培养 茎尖准备 嫁 接 嫁接苗培养 移植。 3. 抗病毒药剂脱毒 二、病毒检测 主要是对脱毒苗的鉴定。方法有 1. 直接测定法 ： 直接观察待侧植株生长状态是否异 常，茎叶上有无特定病毒引起的可见症状，从而 可判断病毒