2018食品毒理与卫生 实训项目 实训项目.pptVIP

二、试剂和材料 除非另有说明, 本方法所用试剂均为分析纯, 水为 GB/T6682 规定的一级水。 试剂 亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O] 乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O] 冰乙酸(CH3COOH) 硼酸钠(Na2B4O7·10H2O) 盐酸(HCl,ρ =1.19 g/mL) 对氨基苯磺酸(C6 H7NO3S) 盐酸萘乙二胺(C12H14N2 · 2HCl) 三、试剂配制 亚铁氰化钾溶液(106 g/L) : 称取106.0 g 亚铁氰化钾, 用水溶解, 并稀释至1 000 mL。 乙酸锌溶液(220 g/L) : 称取220.0 g 乙酸锌, 先加30 mL 冰乙酸溶解, 用水稀释至1 000 mL。 饱和硼砂溶液(50 g/L) : 称取5.0 g 硼酸钠, 溶于100 mL 热水中, 冷却后备用。 盐酸(20%) : 量取20 mL 盐酸, 用水稀释至100 mL。 对氨基苯磺酸溶液(4 g/L) : 称取0.4 g 对氨基苯磺酸, 溶于100 mL 20% 盐酸中, 混匀, 置棕色瓶中, 避光保存。 盐酸萘乙二胺溶液(2 g/L) : 称取0.2 g 盐酸萘乙二胺, 溶于100 mL 水中, 混匀, 置棕色瓶中,避光保存。 标准品 亚硝酸钠(NaNO2 ,CAS 号:7632-00-0) : 基准试剂, 或采用具有标准物质证书的亚硝酸盐标准溶液。 标准溶液配制 亚硝酸钠标准溶液(200 μg/mL, 以亚硝酸钠计) : 准确称取0.100 0 g 于110 ℃ ~120 ℃ 干燥恒重的亚硝酸钠, 加水溶解, 移入 500 mL 容量瓶中, 加水稀释至刻度, 混匀。 亚硝酸钠标准使用液(5.0 μg/mL) : 临用前, 吸取2.50 mL 亚硝酸钠标准溶液, 置于100 mL 容量瓶中, 加水稀释至刻度。 四、仪器和设备 天平: 感量为0.1 mg 和1 mg。组织捣碎机。 超声波清洗器。 恒温干燥箱。分光光度计。 五、分析步骤 1.试样预处理蔬菜、 水果: 将新鲜蔬菜、 水果试样用自来水洗净后, 用水冲洗, 晾干后, 取可食部切碎混匀。 将切碎的样品用四分法取适量, 用食物粉碎机制成匀浆, 备用。 如需加水应记录加水量。 粮食及其他植物样品: 除去可见杂质后, 取有代表性试样50 g~100 g, 粉碎后, 过0.30 mm 孔筛, 混匀, 备用。 2.提取 称取5 g( 精确至0.001 g) 匀浆试样( 如制备过程中加水, 应按加水量折算) , 置于250 mL具塞锥形瓶中, 加12.5 mL50 g/L 饱和硼砂溶液, 加入70 ℃ 左右的水约150 mL, 混匀, 于沸水浴中加热 15 min, 取出置冷水浴中冷却, 并放置至室温。 定量转移上述提取液至200 mL 容量瓶中, 加入5 mL106 g/L 亚铁氰化钾溶液, 摇匀, 再加入 5 mL220 g/L 乙酸锌溶液, 以沉淀蛋白质。 加水至刻度, 摇匀, 放置30 min, 除去上层脂肪, 上清液用滤纸过滤, 弃去初滤液30 mL, 滤液备用。 3.亚硝酸盐的测定 吸取40.0 mL 上述滤液于50 mL 带塞比色管中, 另吸取0.00 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL、2.50 mL 亚硝酸钠标准使用液( 相当于0.0 μg、1.0 μg、2.0 μg、3.0 μg、4.0 μg、5.0 μg、7.5 μg、10.0 μg、12.5 μg 亚硝酸钠) , 分别置于50 mL 带塞比色管中。 于标准管与试样管中分别加入2 mL4 g/L 对氨基苯磺酸溶液, 混匀, 静置3 min~5 min 后各加入1 mL2g/L 盐酸萘乙二胺溶液, 加水至刻度, 混匀, 静置15 min, 用1 cm 比色杯, 以零管调节零点, 于波长 538 nm 处测吸光度, 绘制标准曲线比较。 同时做试剂空白。 六、亚硝酸盐含量计算 X1 = m2 ×1 000/(m3 ×V1×1 000/ V0) 式中:X1 —试样中亚硝酸钠的含量, 单位为毫克每千克(mg/kg) ;m2—测定用样液中亚硝酸钠的质量, 单位为微克(μg) ; 1 000—转换系数;m3—试样质量, 单位为克(g) ;V1—测定用样液体积, 单位为毫升(mL) ;V0—试样处理液总体积, 单位为毫升(mL) 。结果保留2 位有效数字。 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 七、实验结果 亚硝酸钠质量/μg 吸光度 0.0 0.075 40.0 0.722 80.0 1.287 120.0 1.804 160.0