双缩脲法测定蛋白质浓度.docxVIP

PAGE PAGE #/ 4 双缩脲法测定蛋白质浓度 ――生物化学实验 一、目的 了解并掌握双缩脲法测定蛋白质浓度的原理和方法。 二、原理 具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应 (蛋白质分子中有 -CS-NH -CH 2-NH 2, -CHNH 2CH 2OH 等基团，这些基团亦可与碱性高价铜呈颜色反应 )，在碱性溶液中蛋白 质与 Cu 2+ 形成紫色配合物，在 540m 处有最大吸收。 在一定浓度的范围内，蛋白质浓度与双缩脲反应所呈的颜色深浅成正比， 可用比色法定量测定。 双缩脲法最常用于需要快速但不要求十分精确的测定。硫酸铵不干扰此呈 色反应，但Cu2 +离子容易被还原，有时会出现红色沉淀。 三、实验仪器 容量瓶 10ml( X6) 2．试管 1.5cm x 15cm( X 8) 3．吸管 5.0ml（ x、3） 2.0ml（ X。） 4．722型（或 7220型）分光光度计。 四、实验试剂 1、 双缩脲试剂：将 0.175gCuSO 4 5H 20 溶于约 15ml 蒸馏水，置于 l00ml 容量瓶中，加入 30ml 浓氨水 30ml 冰冷 的蒸馏水和20ml饱和氢氧化钠溶液，摇匀，室温放置 1?2h,再加蒸馏水至刻 度，摇匀备用。 2、 卵清蛋白液： 约 lg 卵清蛋白溶于 l00ml 0.9% NaCI溶液，离心，取上清液，用克氏定氮法测定其蛋白质含量。