蛋白质化学6下.pptxVIP

复 习 牛牛文库文档分享1、含有杂环的亚氨基酸是_____。 脯氨酸2、组成蛋白质的氨基酸除____外均含有不对称碳原子，所以具有_____。 甘氨酸，旋光性3、异亮氨酸属于哪一类氨基酸（ ） A 支链 B 芳香族 C 杂环 D 碱性A4、下列属于必需氨基酸的是（ ）A 天冬酰胺 B谷氨酰胺 C酪氨酸 D赖氨酸D第三章 蛋白质化学（下） 牛牛文库文档分享第六节 蛋白质的结构（重点） 牛牛文库文档分享蛋白质结构的研究内容由哪些氨基酸组成？各种氨基酸的含量？氨基酸之间如何连接？不同氨基酸的排列顺序如何？氨基酸长链的空间形状如何？ 牛牛文库文档分享蛋白质的结构层次一级结构二级结构超二级结构结构域三级结构四级结构 牛牛文库文档分享一、一级结构（序列）多肽链中氨基酸残基的排列顺序，也称为蛋白质的序列或蛋白质的化学结构。 左N右C 牛牛文库文档分享什么是序列分析？ 根据完全水解所获得的氨基酸组成知识，按照预先设计好的策略，对多肽进行部分水解、末端测定、短序列分离和完全水解等，从而得出蛋白质多肽链的完整的氨基酸序列。 牛牛文库文档分享蛋白质序列分析的意义 研究蛋白质结构和功能的关系人类血红蛋白变种有300多种,有些变种严重影响分子的携氧的能力，进行序列分析有助于说明血红蛋白的结构与功能差异寻找基因根据蛋白质序列可以反推DNA序列，有助于确定基因和克隆基因 牛牛文库文档分享蛋白质序列分析原则 1、确定多肽链的数目，肽链拆分----获得单一多肽链 牛牛文库文档分享多肽链的拆分非共价交联酸、碱、高浓度的盐、变性剂处理8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍通过链间二硫键交联或者存在链内二硫键氧化或者还原二硫键使其断开 牛牛文库文档分享1）巯基乙醇法用过量巯基乙醇还原二硫键使其断开加入碘乙酸保护生成的巯基 牛牛文库文档分享2）过甲酸法加入发烟甲酸将二硫键氧化成磺酸基从而断开二硫键 牛牛文库文档分享3）二硫苏糖醇法加入二硫苏糖醇或者二硫赤蘚糖醇还原二硫键 牛牛文库文档分享 蛋白质序列分析原则 2、蛋白质多肽链的组成分析---确定每条肽链的氨基酸的种类和数量（需要蛋白质完全水解） 牛牛文库文档分享蛋白质序列分析原则 3、蛋白质多肽链的末端分析---确定末端氨基酸N末端测定C末端测定 牛牛文库文档分享1）N-末端测定DNFB法PITC法DNS法氨肽酶法 牛牛文库文档分享DNS法丹磺酰氯（二甲基氨基萘磺酰氯）6mol/L HCl 105℃水解18 牛牛文库文档分享氨肽酶法外切酶，从多肽链的N-端逐个的向里水解根据不同的反应时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数量，按反应时间和氨基酸残基释放量作动力学曲线，从而知道蛋白质的N-末端残基顺序 牛牛文库文档分享2）C-末端测定肼解法多肽与肼在无水条件下加热，C-端氨基酸即从肽链上解离出来，其余的氨基酸则变成肼化物肼化物能够与苯甲醛缩合成不溶于水的物质而与C-端氨基酸分离 牛牛文库文档分享羧肽酶A作用于促肾上腺皮质激素氨基酸的释放曲线羧肽酶法 牛牛文库文档分享蛋白质序列分析原则 4、对多肽链进行部分水解(酶解)，获得一套短肽混合物；用不同的酶分别进行,得到几套短肽混合物 牛牛文库文档分享肽链部分水解的方法化学法溴化氰法羟胺法酸酶解法（切点多，肽段大小不一）胰蛋白酶 牛牛文库文档分享1）溴化氰法断开甲硫氨酸羧基参与的肽键由于蛋白质中含有很少的甲硫氨酸，因此可以得到较大的片断 牛牛文库文档分享2）羟胺法羟胺能专一地裂解Asn-Gly的肽键 牛牛文库文档分享蛋白质序列分析原则 5、分离短肽混合物---获得单一的短肽 6、测定所有短肽的的氨基酸序列7、将所获得的所有序列进行拼凑,确定蛋白质序列8.测定二硫键位置，测出全部一级结构 牛牛文库文档分享 牛牛文库文档分享二、二级结构蛋白质多肽链自身的折叠和盘绕方式肽链骨架原子的相对空间位置，不涉及侧链维持二级结构的力：氢键 牛牛文库文档分享肽平面肽平面各个原子所构成的键长、键角在蛋白质构象中恒定不变 牛牛文库文档分享二级结构的种类α-螺旋β－折叠β－转角自由回转 牛牛文库文档分享 牛牛文库文档分享1、α-螺旋绝大多数为右手螺旋α-角蛋白：全部由α-螺旋构成结构要点每3.6个氨基酸残基螺旋上升一圈每圈向上移动0.54nm氨基酸残基侧链伸向外侧，相邻螺圈间形成氢键，氢键基本与中心轴平行SN：3.613 牛牛文库文档分享α-螺旋完成一个螺旋需3.6个氨基酸残基，螺旋每上升一圈，螺距为0.54nm，相邻两个氨基酸残基之间的轴心距为0.15 牛牛文库文档分享α-螺旋l?维持螺旋的作用力是氢键，相邻螺圈之间 形成链内H键，H键的取向几乎与轴平行。 H键位置：由每个残基的C＝O基与其相 邻的第四个残基的 －NH－的形成H键， 所有肽键的NH和CO都参与氢键的形成， 故α-螺旋很稳定。