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生物安全櫃種類、選用依據及操作安全介紹 勞工安全衛生研究所衛生組 張靜文研究員、于台珊助理研究員 在生物實驗室的各項防護設施中，為避免生物性樣本、化學試劑等物質外逸造成人員健康上危害或為確保操作試驗物的潔淨，生物安全櫃可說是進行生物性相關試驗不可或缺的基礎工具，除使用上極為普遍外，更由於其選擇與使用的正確性與實驗室人員安全息息相關，因此成為使用者極為重要的課題，以下我們茲就國際上生物安全櫃的種類分級、與不同安全等級實驗室的使用搭配以及其操作上應注意的安全通則做一簡介： 一、生物安全等級 提到生物安全櫃的種類與選擇，首先必須考量其防護層級應符合使用場所的生物安全等級(Biological Safety Level, BSL)，再者，則需考慮作業流程的需求及場地空間等工程上限制以挑選合適的安全櫃類型。歐美幾大先進國家在生物安全等級分類上各有相關規範，雖然若干定義上稍有不同，但對於危害等級分類的範疇卻十分接近，國內現行的規範主要依循國科會制定的「基因重組實驗守則」，其內容是參考美國國家衛生院（NIH）於1997年出版的「DNA分子重組研究指引（NIH Guidelines For Research Involving Recombinant DNA Molecules）」，將實驗規模20公升以下的培養分為P1至P4四級，20公升以上的則分為LS-C、LS-1、LS-2三級，然而其適用範圍僅限於基因重組實驗。 除基因重組實驗的規範外，美國國家衛生院於1993年亦與疾病管制中心（CDC）聯合針對微生物及其實驗室訂出生物安全等級的分類，針對各病原體對人體、環境的危害程度分為四大類，詳細分類內容可參考其出版之「微生物學級生醫實驗室生物安全（Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, BMBL）」一書，茲以此為例整理生物安全等級分類及操作準則如下： (1) 生物安全第一類：生物病媒不會引致健康成人、動物產生疾病或者環境危險。實驗室無須與建築物中的一般區域隔離，一般不需特殊防護的設備及設施，但工作人員仍應接受實驗操作的特別訓練。 (2)生物安全第二類：生物病媒可能會引致健康作業員、動物產生疾病或環境之中度風險。工作人員需受過使用致病物質的特殊訓練並由適任的專家指導，同時工作進行中應有門禁管制；需特別小心受污染的尖銳物品，可能產生氣膠或濺灑的操作程序，應使用生物安全櫃或各式物理性防護設備。 (3) 生物安全第三類：生物病媒可能產生健康成人致死的嚴重危險，並為氣膠傳播。實驗室須特殊設計與建造，同時工作人員應接受處理致病性及致命物質特別訓練，且由具備相當經驗且適任的科學家監督管理。處理感染性物質的過程需在生物安全櫃中進行，或使用其它物理性防範裝置，或工作人員穿配恰當保護性衣著與裝置。 (4) 生物安全第四類：生物病媒可能產生健康成人致死的嚴重危險，並且其傳播的方式與醫療的方法仍無法獲得。實驗室設於不同棟或同棟建築內的管制區域，嚴格管制實驗室門禁並完全與其他區域隔離，工作人員則必須接受處理極度危險的感染性物質的特別訓練，充分了解標準及特殊操作、設備、實驗室的防護功能，並由具備相當經驗且適任的科學家監督管理。在此級設施中的工作區，所有活動皆限於第三級生物安全櫃中；或於第二級生物安全櫃中，工作人員穿著連身式具支持生命系統通風設備的正壓工作服。 然在實驗操作上，除了依據病源體本身的生物種類分級外，亦需同時考慮其操作方式與數量，以SARS-CoV為例（如下表1所示，整理自國科會「基因重組實驗守則」），不同的操作方式與操作數量即直接影響設備、實驗室及操作規範對應的生物安全等級。 表1 操作SARS-CoV（Risk Group 3）所需之生物安全等級 操作方式 設備與實驗室設計 操作規範 血液/尿液樣本 BSL 2 ( P2 ) BSL 2(P2) 非血非尿樣本 　 　 核酸萃取 BSL 2 ( P2 ) BSL 3(P3) 核酸分子分析 BSL 2 ( P2 ) BSL 2(P2) 細胞培養 BSL 3 ( P3 ) BSL 3(P3) 動物病毒接種 BSL 3 ( P3 ) BSL 3(P3) 總量20 ml或總 病毒數1.0E+09 BSL 4 ( P4 ) BSL 4(P4) 備註：關於病原體的生物種類分級，我國國科會制定之「基因重組實驗守則」亦有列表規範，可供參考。 二、生物安全櫃之分級 在瞭解了安全櫃欲擺置使用場所的生物安全分級後，接著就是依操作需求及場地限制選擇合適類型的生物安全櫃。在「微生物學級生醫實驗室生物安全」一書中，將各式安全櫃依適用的生物危害層級分為三級，其中第二級的生物安全櫃依美國2002年最新修正的第二級生物安全櫃標準NSF /ANSI 49又分為A1、A2、B1