年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中骨连蛋白分析.docVIP

精品文档（可编辑） 值得下载 年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中骨连蛋白分析 摘要：目的 探讨LECs中SPARC于年龄相关性白内障晶状体中的临床表现，对比不同年龄白内障晶状体中SPARC的表达。方法 将108例白内障患者按照年龄分组，利用常规蛋白印迹法检测各组白内障LECs中SPARC含量，并对比研究。结果 白内障患者年龄大的一组，其LECs中的SPARC表达增加，并且SPARC的表达随着年龄的增长，表达愈来愈强烈。结论 SPARC在人体白内障的发病过程中可能起到一定的作用，并且白内障患者的晶状体LECs中SPARC与患者的年龄相关。 关键词：年龄相关性；对比研究； SPARC LECs 晶状体上皮细胞（LECs’ short of Lens Epithelial Cells）对白内障发病密切相关，在白内障的发病机理中具有重要意义，这与其结构与功能的变化决定晶状体（Crystalline lens）透明状况。骨连蛋白（SPARC）是由多细胞分泌形成的小分子蛋白[1]，于人体中表达活跃，并有研究结果表明白内障发病与SPARC含量增加有关。本文分组对108例白内障患者的LECs中SPARC含量进行对比研究，并将其分成正常对照组、氧化损伤组和热应激处理组，分析SPARC在不同年龄白内障中的致病机理，以及探讨其在白内障的发病过程中起到的作用，并且分析其中的致病机理。 1 资料与方法 1.1一般资料 以本院108例白内障超声乳化手术患者的晶状体前囊膜作为实验研究材料，108例患者中有男性56例，女性52例，年龄36～82岁；所用实验试剂为羊抗人SPARC单克隆抗体（美国Santa cluz 公司）、DMEM培养基（美国Gibco公司）、胎牛血清（美国Gibco公司）；所用仪器为ThermoMLLtiskanMK3酶标仪、CO2培养箱、低温高速离心机、JIM-X电泳仪、凝胶自动成像分析仪、GIS-700D型凝胶图像系统。永生化人LECs系SRA01/04由中国医学科学院肿瘤研究所提供。 1.2方法 1.2.1样本采集 对照组材料来自12例正常人角膜晶状体前囊膜，在晶状体的赤道部，剪开前囊然后取出囊膜。实验组为白内障手术患者108例，根据年龄段分成4组（78岁年龄段组各27例），超声乳化手术后取5mm直径晶状体前囊膜放入低温冰箱中保存。在实验前把每组的囊膜集合放一起，合并后每组一共5例，临床上分为皮质型。 1.2.2细胞样本 采用人LECsSRA01/04传代培养样本并将其分成正常对照组、氧化损伤组和热应激处理组。细胞中加入200*106mol/LH2O2作用6 h；热应激处理组： 42e30min， 37e恢复2 h。 1.2.3检测SPARC含量 利用常规蛋白印迹法检测各组白内障LECs中SPARC含量：把细胞样本囊膜剪碎并放入200μL裂解液中进行超声粉碎，接着进行4℃、12000r/m in离心30min。BCA法定蛋白，对制成蛋白进行凝胶电泳[2]。电泳后将蛋白质转移到硝酸纤维素膜上，经过50min后，把膜放入3%BSA封闭12h。把BSA液体倒掉后加入1：500一抗进行孵育，1h之后用TBS洗膜，重复三次，然后加入BCIP/NBT显色剂显色。接着用GIS-700D型凝胶图像系统扫描分析，记录分析实验数据[3]。 1.3统计学方法 采用SPSS16.0统计学软件对本实验数据进行统计学分析。本次实验的数据都服从正态分布，并且方差齐性检测出方差齐。本次研究中，采用单因素方差分析进行不同年龄组的LECs中SPARC的平均灰度值的比较，采用SNK-q检验来对各组间平均灰度值的两两比较，结果有统计学意义（P78岁年龄段组比其他三组的表达都更强烈（P 0.01），65～78岁组比64岁一下两组表达均增高（P 0.01），48～64岁组比48岁组增高，但是差异无统计学意义（P= 0.055） 2.2细胞样本 对照组43000处都没见明显的条带，氧化损伤组和热应激处理组都能见到明显的SPARC表达。在细胞样本正常对照组未见明确的SPARC表达，但是在白内障组中可见明显的表达。 3 讨论 体内很多细胞均可分泌SPARC这种蛋白，所以LECs也有比较丰富的表达。SPARC的生物学功能很多，主要是抗增生、调节细胞和细胞外基质的作用、与细胞因子结合以及相互作用、对生长发育的影响以及对损伤愈合血管的发生有影响等。 早期研究中发现，SPARC是一种细胞周期抑制剂，能够抑制细胞周期性分化，它的去粘附作用主要是由于局部粘连的溶解和肌动蛋白纤维的重组造成的[4]。基于SPARC的调节作用体现在调节细胞对细胞外环境的变化作用相应的表达，这种作用能够影响生长因子，细胞外基质结构蛋白的表