HPLC法测蔗糖,葡萄糖,果糖含量.docVIP

HPLC法测蔓菁中果糖，葡萄糖，蔗糖的含量 试剂与仪器 果糖，葡萄糖，蔗糖的标准样品 2．乙醇，乙腈为色谱纯，实验用水为超纯水 3. 色谱仪 糖标准溶液的配制 称2g果糖，葡萄糖，蔗糖 至100ml容量瓶中，加水定容。（20mg/ml） 逐级稀释至10、5、2.5、1.25、0.625mg/mL。 上机进样分析前经0.45μm 微孔滤膜过滤。每个样品重复3 次。 三、样品处理 样品在液氮中磨成粉末状，精确称取样品粉末1.00g，加入80% 的乙醇5mL。 80℃恒温水浴30min。 12000r/min，离心20min，取上清液。 残渣加入5mL 80% 的乙醇溶液重复提取1 次，合并提取上清液。 90℃水浴中蒸干乙醇，加入高纯水定容至5mL，混匀后用一次性注射器抽取提取样液， 经0.45μm 微孔滤膜过滤后以备上机进样分析。每个样品重复3 次。 四、色谱条件的优化 流动相的选择 采用Agilent Zorbax carbohydrate 柱以乙腈-水比例为85:15、80:20、75:25、70:30(V/V)不同比例的 流动相测定糖混合标准品和蔓菁提取液中各种糖成分的含量和分离情况。 选出在分离速度和分离效果上最佳的流动相。 色谱柱柱温的选择 比较色谱柱温度在2 5 、2 8 、3 0 、35℃条件下糖混合标准品和蔓菁提取液中各种糖成分的含量和分离情况。 选出在分离速度和分离效果上最佳的柱温。 流动相流速的选择 在0.8～1.2mL/min 范围内改变流动相流速，找出 3 种糖出峰时间合适，峰形较好的流速。 五、标准曲线的制作 1. 取果糖、葡萄糖、蔗糖各级标准溶液( 2 0 、1 0 、5、2.5、1.25、0.625mg/mL)，进样20μL，2.以标样峰面积y 为纵坐标、标样质量浓度x 为横坐标，绘制标准溶液曲线，得线性回归方程， 六、糖含量分析 测定两个不同甘蔗品种(福农28 和ROC-5)偶数节间果糖、葡糖糖、蔗糖的色谱峰峰面积，代入工作曲线别计算其含量。图为福农28 第6 节间样品色谱图。