高效液相色谱概述、特点与作用.ppt

高效液相色谱概述、特点和作用;以液体作为流动相的色谱过程 ;概述 － 特点;概述 － 特点;在所有色谱技术中，液相色谱法是最早（1903年）发明的，但其初期发展比较慢，在液相色谱普及之前，纸色谱法、气相色谱法和薄层色谱法是色谱分析法的主流。 到了20世纪60年代后期，将已经发展得比较成熟的气相色谱的理论与技术应用到液相色谱上来，使液相色谱得到了迅速的发展。特别是填料制备技术、检测技术和高压输液泵性能的不断改进，使液相色谱分析实现了高效化和高速化。 具有这些优良性能的液相色谱仪于1969年商品化。从此，这种分离效率高、分析速度快的液相色谱就被称为高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC），也称高压液相色谱法或高速液相色谱法。 ;气相色谱适合分析较易挥发、且化学性质稳定的有机化合物； 而HPLC则适合于分析那些用气相色谱难以分析的物质，如挥发性差、极性强、具有生物活性、热稳定性差的物质。 现在，HPLC的应用范围已经远远超过气相色谱，位居色谱法之首。 ;通常将液相色谱法按分离机理分成吸附色谱法、分配色谱法、离子色谱法和凝胶色谱法四大类。 按分离机理，有的相同或部分重叠。但这些方法或是在应用对象上有独特之处，或是在分离过程上有所不同，通常被赋予了比较固定的名称。 ;高效液相色谱的类型 ;液相色谱仪单元组件;液相色谱仪的工作流程;液相色谱流程图;基本理论和条件选择;一、塔板理论;1.;高效液相色谱概述、特点和作用;二、速率理论;2.;传质阻力项：;H;高效液相色谱概述、特点和作用;高效液相色谱概述、特点和作用;提高填料装填的均匀性 减小填料的粒度 低粘度的流动相的使用 适当提高柱温 降低流速 ;柱前峰展宽：进样引起 柱后峰展宽：接管、检测器的流通池体积引起;1. 固定相与装柱方法的选择： 选粒径小的、分布均匀的球形固定相 （dp≤10μm） 首选化学键合相，匀浆法装柱 2. 流动相及其流速的选择： 选粘度小、低流速的流动相——甲醇， 约1ml/min 3. 柱温的选择：选室温25℃左右;一、液固吸附色谱法（LSC） (liquid-solid adsorption chromatography) 二、液液分配色谱法（LLC） (liquid-liquid partition chromatography, chemical bonded phase chromatography 三、离子色谱法（IC） （ion-exchange chromatography and ion pair chromatography) 四、空间排阻色谱法（SEC） （ steric exclusion chromatography ;1．分离机制：利用溶质分子占据固定相表面吸附 活性中心能力的差异 ;适用范围：分子质量中等的油溶性试样。对具有不同官能团的化合物和异构体有较高的选择性。 缺点：拖尾严重;概念：流动相和固定相都是液体，但互不相溶，两者之间有一个明显的分界面。 1．分离机制：利用组分在两相中溶解度的差异 2．固定相：载体+固定液（物理或机械涂渍法） 缺点：系统内部压力大，易流失，不实用 固定液——极性→NLLC 固定液——非极性→RLLC;3．正相色谱——固定液极性 流动相极性（NLLC） 极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱 适于分离极性组分 反相色谱——固定液极性 流动相极性（RLLC） 极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱 适于分离非极性组分;（一）常规化学键合相;（二）反相键合相固定相;4．流动相极性与k的关系： 流动相极性↑，洗脱能力↓，k↑，组分tR↑ 5．出柱顺序：极性大的组分先出柱 极性小的组分后出柱 6．适用：非极性~中等极性组分（HPLC80%问题）;4．流动相极性与k的关系： 流动相极性↑，洗脱能力↑，组分tR↓，k↓ 5．出柱顺序：结构相近组分，极性小的组分先 出柱极性大的组分后出柱 6．适用： 氰基键合相与硅胶的柱选择性相似（极性稍小） 分离物质也相似 氨基键合相与硅胶性质差别大，碱性 分析极性大物质、糖类等;1．反相离子对色谱法（IPC或PIC） ;反相离子对色谱 RP-Ion-Pair HPLC;2．反相离子抑制色谱;2）k的影响因素：与流动相极性有关，还与pH值有关 选择流动相：应同时考虑极性及p