综设实验以α-胰凝乳蛋白酶为催化剂在有机溶剂中合成n-保护的亮-脑啡肽三肽片段.docx

课程名称： 课程名称： 实验时间： 实验地点： 专业年级： 学生姓名： 学 号: 指导老师： 北京师范大学 化学学院化学综合实验实验报告 以a -胰凝乳蛋白酶为催化剂在有机溶剂中合成 N-保护的亮-脑 啡肽三肽片段 2015.9.23 — 2015.10.28 基础化学实验中心化学综合实验室 2013 级 2 班 张钰 201311151046 邢国文 以a -胰凝乳蛋白酶为催化剂在有机溶剂中 合成N-保护的亮-脑啡肽三肽片段 张钰北京师范大学 化学学院 摘要：推荐一个面向理科高年级本科的化学生物学综合实验。以二氯甲烷为溶 剂，使用a -胰凝乳蛋白酶为催化剂合成 N-保护的亮-脑啡肽三肽片段。 关键词： 综合实验 化学生物学 酶促合成 亮-脑啡肽 a- 胰凝乳蛋白酶 一、 实验目的 1、 在做实验的同时开阔视野，了解一些近年来学科交叉研究领域的研究热点； 2、 熟悉一些化学生物学实验的基本实验方法与技巧， 为今后的进一步科研深造 奠定坚实的实验基础； 3、 通过本课程的训练，有效的提高独立科研能力和科研创新能力； 4、 通过四步反应(独立完成三步)合成 N-保护的亮-脑啡肽三肽片段； 二、 实验原理 本实验以酪氨酸(Tyr )、双甘肽(Gly-Gly )为起始原料，经过四步反应得到 了 N-保护的亮-脑啡肽前三肽Z-Tyr-Gly-Gly-OEt 。 1、 酪氨酸在氯化亚砜的作用下酯化，得到酪氨酸乙酯盐酸盐( HCl ? Tyr-OEt); 2、 酪氨酸乙酯与苄氧羰酰氯( Z-Cl )在碱性条件下反应，得到苄氧羰酰酪氨酸 乙酯( Z-Tyr-OEt )； 3、 Gly-Gly 在氯化亚砜作用下酯化，得到甘胺酰甘氨酸乙酯盐酸盐 (HCl - Gly-GLy-OEt); 4、 Z-Tyr-OEt与Gly-GLy-OEt在二氯甲烷中以a -胰乳蛋白酶催化得到亮-脑啡 肽的前三肽，即N-保护的苄氧羰酰酪氨酰甘胺酰甘氨酸乙酯 ( Z-Tyr-Gly-GLy-OEt )。 二、实验药品 药品名 形状 分子 量 nD d mp/° C bp/ ° C 溶解性 水 乙 醇 乙 醚 乙醇 无色液体 46 1.361 4 0.79 -117. 3 78.5 易 溶 易 溶 易 溶 氯化亚砜 淡黄色发烟 液体 118.9 6 \ 1.64 -105 78.8 分 解 易 溶 易 溶 Gly-Gly 白色叶状结 晶或片状晶 体，有光泽 132.1 2 \ \ 262 \ 溶 难 不 Tyr 白色结晶粉 末 181.2 0 \ 1.456 342 \ 难 不 不 乙醚 无色透明液 体 74.12 1.35 ( ).7134 -116. 3 34.6 微 溶 溶 HCI-Tyr-OEt 白色结晶 245.7 \ \ \ \ 溶 溶 溶 HCI ? Gly-GLy-O Et 白色结晶 196.6 \ \ \ \ 溶 溶 溶 乙酸乙酯 无色液体 88.11 1.371 9 溶 溶 溶 0.902 -83.6 77.2 碳酸氢钾 白色晶体 100.1 2 \ \ \ \ 溶 不 不 苯甲醇 无色液体 108.1 3 1.539 6 1.0419 -15.3 205.7 溶 易 易 苄氧羰酰氯 无色有刺激 性气味的液 体 170.5 \ \ \ \ 分 解 溶 溶 硫酸镁 白色粉末 120 \ 2.66 \ 112.4 溶 微 不 石油醚 无色透明液 体 \ \ ( 0.64 ? 0.66 \ 40? 80 不 溶 溶 Z-Tyr-OEt 白色晶体 343 \ \ \ \ \ \ \ Z-Tyr-Gly-Gly- OEt 白色晶体 449.1 \ \ \ \ \ \ \ 三乙胺 无色油状液 体，有强烈 氨臭 0.726 89.5 微 溶 溶 101.1 9 1.401 0 -114. 8 丙酮 无色液体 58.08 0.784 溶 溶 溶 1.3588 -94.7 56.05 四、实验步骤 、HCI ? Gly-Gly-OEt 的合成 、取8MI无水乙醇，用冰盐浴冷至-10 C,缓慢加入2MI氯化亚砜，加完后继 续搅拌20min。 、加入Gly-Gly 1.0g，先初步摇匀，放入磁子，用磁力搅拌器室温搅拌 3天。 、用旋转蒸发仪减压除去溶剂得到白色固体。 、用乙醇-乙醚重结晶：先用3mL乙醇微热，将固体溶解；在逐步加入乙醚， 刚开始一段时间没有晶体析出，用玻璃棒摩擦瓶壁，很快析出大量白色结晶。 、抽滤。烘干并称重，记录质量 m仁1.16g。 、Z-Tyr-OEt 的合成： 、将HCI ? Tyr-OEt 0.8g悬浮于16mL乙酸乙酯中，加入 KHC32g的13mL水溶 液，冰浴下快速搅拌，15min内滴加Z-Cl的苯甲醇溶液0.7MI。 、加完后搅拌2