茶多酚提取综合试验(1).docx

茶叶提取茶多酚综合实验 、实验目的 1） 熟悉酒石酸亚铁法测定茶多酚含量； 2） 掌握天然植物中提取活性物质的实验方案设计及操作方法； 3） 熟练掌握各种实验操作的正确方法； 4） 熟悉数据处理及科技论文的写作方法。 、实验原理 茶多酚是一类以儿茶素类为主体的多酚类化合物，由于其酚性羟基易氧化而提供质子 氧化和消除自由基作用，是一种理想的天然抗氧化剂。 OHR1 OH R1 含醇羟基的有机溶剂对植物多酚具有良好的溶解性，而含水的有机溶剂对多酚的溶解能力比纯有机溶 剂大，这是因为含水有机溶剂可破坏多酚分子间的氢键从而减弱了多酚间的缔合，有利于多酚的溶出。 二、试验仪器及药品 BS210S电子分析天平 722分光光度仪 KQ-5200超声波振荡器 RE-52D旋转蒸发器 粉碎机 试验原料：苏州碧螺春绿茶（2008年春制取，冰箱保存） 三、 试剂与溶液配制 标准溶液的配制： 精确称取没食子酸乙酯（100 C烘干燥1h） 25mg，水溶解，定容至25mL容量瓶中，作 为标准溶液。 酒石酸铁溶液 称取硫酸亚铁（GB 664） 1.0g，酒石酸钾钠（GB 1288 ） 5.0g，加水溶解并定容至1L,可稳定10天。 pH7.5的磷酸缓冲液 a液：1/15mol/L的磷酸氢二钠溶液：称取磷酸氢二钠（ GB 1263 ） 23.877g，加水溶解并稀释至1L。 b液：1/15mol/L的磷酸二氢钾溶液：称取经 110C烘干2h的磷酸二氢钾（GB 1274） 2.2695g，加水溶解至 250mL。 c液：.取a液85mL和b液15mL混匀，即得pH7.5的缓冲液。 四、 试验方法 （一）分析方法 多酚类物质能与亚铁离子生成紫蓝色络合物。用分光光度法测定其含量。虽然各种儿茶素的呈色度不 同，但茶多酚中的儿茶素组成范围大致相同， 在此范围内，对吸光度的影响不大， 故用一条标准曲线即可。 此标准曲线与没食子儿茶素没食子酸酯的标准曲线一致，但因没食子儿茶素没食子酸酯不易得到，故用没 食子酸乙酯。因10mg没食子酸乙酯的吸光度与 15mg没食子儿茶素没食子酸酯的吸光度相等，故规定从 没食子酸乙酯的标准曲线得到的量乘以 1.5作为茶多酚的换算系数。 1）标准曲线的制作： 分别取1 mg/mL没食子酸丙酯标准液 GE 0.00, 0.25, 0. 50 , 0.75, 1.00, 1.25 mL 于25 mL容量瓶中，加入4 mL蒸馏水，再加入酒石酸亚铁溶液 5 mL ,用pH7. 5的磷酸缓冲液冲稀至刻度， 摇匀。722可见分光光度计在540 nm处以试剂空白为对照，测量吸光度。回归标准曲线方程 c=k A+b 2）供试液的制备 准确称取茶树花粉碎样品 2g,在60%乙醇40mL, 60C温度，浸提时间 20min下，超声波辅助提取， 然后过滤，最后用蒸馏水定容至 100 mL 摇匀，即为供试液。 3）样品的测定 吸取1 mL供试液放入25 mL的容量瓶中，加入4 mL蒸馏水，5.0 mL的酒石酸亚铁溶液。摇匀。用 pH 7.5磷酸缓冲液稀释至刻度，摇匀。按实验方法测定吸光度，算出没食子酸丙酯含量。 （二）实验步骤 不同浓度乙醇水溶液对提取效果的影响 精确称取 2.00g 茶花粉末置于 100mL 三角瓶中，加入 40mL 浓度为 40%、50%、60%、70%、80%、 90%的乙醇溶液，在 60 C水浴中浸提60min。将提取液过滤，滤液用水定容于 100mL容量瓶中，用酒石 酸亚铁分光光度法测定茶花多酚含量。 时间对提取效果的影响 精确称取2.00g茶花粉末置于100mL三角瓶中，加入40mL浓度为60%的乙醇溶液，在60 C水浴中浸 提，时间分别为 15min、30min、45min、60min、75min、90min、120min，将提取液过滤，滤液用水定容 于100mL容量瓶中，用酒石酸亚铁分光光度法测定茶花多酚含量。提取温度为 30C，时间分别为5min、 10min、20min、30min、40min、50min、60min，其它处理同溶剂提取法。 温度对提取效果的影响 精确称取2.00g茶花粉末置于100mL三角瓶中，加入 40mL浓度为60%的乙醇溶液，在 30C、40 C、 50C、60C、70C水浴中浸提60min，将提取液过滤，滤液用水定容于 100mL容量瓶中，用酒石酸亚铁分 光光度法测定茶花多酚含量。提取时间为 20min，其它处理同溶剂提取法。 料液比对提取效果的影响 精确称取2.00g茶花粉末置于 100mL三角瓶中，以料液比 （w/v）1:10、1:15、1:20、1:25、1:30、1:35、 1:40加入浓度为60%乙醇溶液，在60 C水浴中浸提60min。将提取液过滤，滤液用水定容于 100mL容量 瓶中，用酒