发酵工业微生物的选育 教学PPT课件.pptx

发酵工业微生物的选育;二、发酵工业常用菌种及要求;2.发酵工业常用菌种;最常用的工业微生物;最常用的工业微生物;最常用的工业微生物;最常用的工业微生物;藻类;微生物菌种保藏机构名称和缩写;国外重要菌种保藏机构;三、生产中常用菌种的分离、选育（screening ）;1.施加选择压力分离法;2 随机分离方法;;;;选育方法;;HD:高丝氨酸脱氢酶;氨基酸生产菌的要求：;2.2.2食品酶制剂生产有关的微生物;氨基酸生产有关的微生物;1、菌种的分离;①定方案：查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。 ②采样：有针对性地采集样品。 ③增殖：人为地通过控制养分或培条件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。 ④分离：利用分离技术得到纯种。 ⑤发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。;自然界中有目的微生物分离的原则; ①　采　样;;采样季节 以温度适中，雨量不多的秋初为好。 采土方式 在选好适当地点后，用小萨子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。为了使土样中微生物的数量和类型尽少变化，宜将样品逐步分批寄回，以便及时分离。;②　增　殖　培　养;③　纯　种　分　离;④　高产菌株的筛选;⑤　毒　性　试　验;培养分离;;自然选育操作步骤： ; ;②采样的注意事项;采好的样应及时处理，暂不能处理的也应贮存于4℃下，但贮存时间不宜过长。这是因为一旦采样结束，试样中的微生物群体就脱离了原来的生态环境，其内部生态环境就会发生变化，微生物群体之间就会出现消长;③土样采集方法;④植物体采集方法; ⑤水样采集方法;筛选培养基的组成要求;;例：醛肟水解酶的筛选 ;碱性蛋白酶产生菌的筛选;放线菌的分离（actinomycetes）;② 培养基的组成原则 放线菌的分离，要求成分贫脊或底物复杂 分离培养基中加入抗真菌剂制霉菌素或放线菌酮，以抑制真菌的繁殖。 选择性地添加抗生素。 在37℃培养箱中存???3天。 如：土样要求土样风干，磨碎，无菌海绵压印土样后压印平板后培养;③ 次代培养及纯化步骤;真菌分离（eukaryotes，yeast fungi）;生产选种;多酚氧化酶产生菌的筛选;;;酸性纤维素酶产生菌的筛选;;;真菌淀粉酶产生菌的筛选;;2.诱变育种;诱变;诱变剂处理过程中几个有关的问题;1）诱变剂的种类与选择;③诱变剂的选择 碱基类似物和羟胺具有很高的特异性，回复突变率高，效果不大。 亚硝酸和烷化剂应用的范围较广，造成的遗传损伤较多。 紫外线仍十分有效。但会造成不可回复的缺突变，还会影响邻近基因的性能。 ;2) 诱变诱发过程;3) 诱变育种方案与步骤;③诱变筛选的典型流程： 出发菌株 取高产斜面 斜面 菌种保藏 单孢子悬液 转接斜面 诱变处理 摇瓶复筛 稀释涂布平皿 高产菌株（稳定性试验） 单菌落转接斜面 中试考查 摇瓶初筛 生产;诱变育种的一般步骤;① 出发菌株的选择 选择野生型菌株，对诱变处理较敏感，效果好 出发菌株选2～3株，在处理比较后，取更适合的出发菌株作继续诱变。 尽量选择单倍体细胞、单核或核少的多细胞体来作出发诱变细胞 根据诱变剂特性或细胞生理状态或诱变谱选择诱变剂;② 菌悬液的制备 制备单细胞和单孢子、活力类似的菌悬液。 ③ 诱变处理 根据诱变剂特性，结合诱变对象的实际，设计诱变处理方案。;④ 中间培养（稳定性试验） 突变表型有一个表现延迟的过程，即细胞内原有酶量的稀释过程(生理延迟)，需3代以上的繁殖才能将突变性状表现出来。 方法： 处理后细胞在液体培养基中培养几小时，让细胞繁殖5代，以得到纯的变异细胞。;⑤ 分离和筛选 初筛以迅速筛出大量的达到初步要求的分离菌落为目的，以量为主。以变色圈或透明圈的大小将90%的菌落淘汰 复筛则是精选，以质为主，也就是以精确度为主。以效价和稳定性选得优秀菌株;①基本要求： 照射波长：为2537A 照射距离：15～30cm 照射功率：15W 处理时间：几秒至几十分钟 致 死 率：70～80% 菌液密度：细胞数106－108个／ml左右 悬液深度：0.5～1.0cm厚， 操作环境：红灯下进行，电磁搅拌; ②操作步骤 a. 菌液以3000