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活性炭对大别山野生兰花组培快繁影响的实验研究
摘要: 大别山野生兰花 , 兰花属 , 兰科, 具有极高的观赏价值和经济价值。 组织培养是 大别山野生兰花快速繁殖的主要途径之一。活性炭具有较强的吸附作用。我们设计了三 个以大别山野生兰花地下根状茎为外植体的组培实验 , 经过在培养基中添加不同浓度 的活性炭 , 诱导根状茎出芽和幼苗生长。 我们发现 : 适量的活性炭能加速根状茎长粗和 多分枝,活性炭加入量以2g/L较好;当培养基中活性炭含量为2g/L情况下,提高BA或 NAA勺添加浓度,甚至将BA浓度提高近6倍均不能提高茎段的发芽率。在繁殖培养基中 加入活性炭有利于提高成苗率,活性炭加入量以0.5?3.0g/L活性炭的效果最佳。
关键词: 大别山野生兰花 , 组织培养, 根状茎, 活性炭
、 、-
前言
2 月, 安徽省第三届兰花博览会暨淮北市首届兰花展 , 安徽六安市金寨县的大别 山兰花”熊猫蕊蝶”以 120万元成交。
每年的阳春三月 , 大别山区的大集小镇、 街头巷尾、 公路边上总会有不少或肩挑 或车驮的卖野生兰花的人。 她们从大别山区的深山老林里将兰花苗一棵棵连根挖起 , 然 后运到小集市或大城市中贩卖。大别山中的大量野生兰花遭非法采挖。在当前的兰花市 场上, 兰花稀有品种的价格高达数十万元。 在高额利润的刺激下 , 部分地区挖掘野生兰 花达到了疯狂的程度 , 造成野生兰花濒危。
大别山野生兰花 , 兰花属, 兰科, 是单子叶植物 , 为多年生草本。高 20—100厘米, 根长筒状。叶自茎部簇生 , 线状披针形 , 稍具革质, 3 至 5片成一束。其花具有极高的 欣赏价值和经济价值。兰花的组织培养始于 20 世纪 60 年代。当前大约已有 60 余属数 百种兰花能够用组织培养的方法进行繁殖。 在组织培养过程中 , 一般常在培养基中加入 适量的活性炭以吸附培养基中的有害物质。 但活性炭除了吸附培养基中有害物质外 , 同 时又能吸附生长调节物质和其它培养基成分。 为此 , 我们进行了活性炭对大别山野生兰
花根状茎离体培养的影响试验。
1实验材料和方法
1.1实验材料
供试大别山野生兰花品种从合肥市裕丰花市购买,取地下根状茎段为外植体。
1.2实验方法
取3?5cm根状茎在75%酒精中浸泡30s,再放入0.1 %升汞中消毒10?15min, 无菌水冲洗4?5次。将消毒好的根状茎切成1cm长茎段,将供试的茎段接种于7个含 有不同量活性炭的诱导芽分化的培养基中,活性炭加入量设0、0.5、1、2、3、4、 5 g/L。诱导培养基成分为 1/2MS + BA3.5mg/L + NAA0.5mg/L。培养60天后,在无菌条 件下用电子天平测定根状茎鲜重,每种处理测20个,同时记录根状茎出芽数。基本培 养基和活性炭浓度(2g/ L)不变的情况下,BA的添加浓度为3.5、7、10、15、18mg/L, NAA的添加浓度为0.5、1.5mg/L,将供试的茎段分别接种于上述的各种培养基中,培 养60天后测定根状茎出芽数。选择已分化出芽的茎段,接种于分别含活性炭0、0.5、 1、2、3、4、5g/L 的培养基中,培养基成分为 1/2MS+BA 2.0mg/L+NAA 1.0mg/L, 培养60天后测量鲜重及株高。以上各种培养基均加入0.3%蔗糖和0.8%?脂旨,接种后材 料在温度25± 2C、光强2W/m的条件下培养,每天光照10小时。
2实验结果与分析
2.1活性炭对大别山野生兰花根状茎鲜重及出芽率的影响
表一不同活性炭用量对根状茎生长的影响
活性炭用量(g/L)
鲜重增长率(%)
发芽率(%)
0
137.2
90
0.5
169.4
12
1.0
232.1
8
2.0
269.7
4
3.0
208.5
2
4.0
192.8
1
5.0
159.1
0
从实验结果(表1)看出,在1/2MS+ BA3.5mg/L+NAA0.5mg/L的诱导培养基中,加入
不同浓度的活性炭,对根状茎生长有促进作用,且分枝较多,其中以含2g/L活性炭的 效果最佳;活性炭含量高于5g/L时,虽对根状茎稍有促进作用,但不明显。
根状茎鲜重对比图
在不含活性炭的培养基中,茎段发芽率高达92.8%,而在加入不同浓度活性炭的培养 基中,茎段发芽率很低,活性炭浓度超过4g/L时,几乎没有芽分化。
经过实验,我们发现加入适量的活性炭能够吸附培养过程中所产生的不利于细胞 生长的物质如酚、醌类等,使组织生长更好,但浓度太高可能使有利于细胞生长的物 质如生长调节剂等被吸附,从而影响大别山野生兰花根状茎的分化。
根状茎发芽率对比图
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