血清电泳检测规程.docx

血清电泳检测规程 第一法 醋酸纤维素薄膜电泳法 原理 以区带电泳为基础在一种合适的支持介质——醋酸纤维素薄膜上进行的电泳。 试剂 （1）巴比妥缓冲液(pH8.6) 称取巴比妥2.76g，巴比妥钠15.45g，加实验用水溶解使成1000ml。 （2）氨基黑染色液 称取氨基黑10B 0.5g，溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及实验用水40ml的混合液中。（3）漂洗液 量取乙醇45ml、冰醋酸5ml及实验用水50ml，混匀。 （4）透明液 量取冰醋酸25ml，加无水乙醇75ml，混匀。 测定法 取醋酸纤维素薄膜，裁成2cm×8cm的膜条，将无光泽面向下，浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中，待完全浸透，取出夹于滤纸中，轻轻吸去多余的缓冲液后，将膜条无光泽面向上，置含巴比妥缓冲液(pH8.6)电泳槽架上，通过滤纸桥浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中。于膜条上距负极端2cm处，条状滴加蛋白含量约5％的供试品溶液2～3μl，在0.4~0.6mA/cm〔总电流量=电流量（mA/cm） ╳每条膜的宽度（cm）╳膜条数〕电流条件下电泳。同时取人血清作对照，电泳时间以白蛋白与丙种球蛋白之间的电泳展开距离约2cm为宜。电泳完毕，将膜条取下浸于氨基黑染色液中，2～3分钟后，用漂洗液浸洗数次，直至脱去底色为止。将洗净并完全干燥的膜条浸于透明液中，待全部浸透后，取出平铺于洁净的玻板上，干燥后即成透明薄膜，可供测定纯度和作标本长期保存。将干燥的醋酸纤维素薄膜用色谱扫描仪通过反射 （未透明薄膜） 或透射（已透明薄膜）方式在记录器上自动绘出各蛋白组分曲线图，横坐标为膜条的长度，纵坐标为吸收度，以人血清作对照，按峰面积计算各蛋白组分的含量（％）。 【附注】 也可用自动、半自动设备及配套试剂，按其使用说明书操作。 第二法 琼脂糖凝胶电泳法 原理 以区带电泳为基础在一种合适的支持介质——琼脂糖上进行的电泳。 试剂 （1）巴比妥缓冲液(pH8.6) 称取巴比妥4.14g，巴比妥钠23.18g，加实验用水适量，加热使之溶解，放冷至室温，再加叠氮钠0.15 g，溶解后，加实验用水稀释成1500ml。 （2）5%琼脂糖溶液 称取琼脂糖1.5 g，加实验用水50ml和巴比妥缓冲液(pH8.6)50ml，加热使之完全溶解。 （3）0.5%氨基黑溶液 称取的氨基黑10B 0.5g，溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及实验用水40ml的混合液中。 （4）脱色液 量取乙醇45ml、冰醋酸5ml及实验用水50ml，混匀 （5）溴酚蓝指示液 称取溴酚蓝50mg加实验用水使之溶解，并稀释成100ml。 对照品 正常人血清或其他适宜的对照品 供试品溶液制备 供试品原样或用生理氯化钠溶液将供试品稀释成蛋白质浓度为1％～2％的溶液。 测定法 趁热将琼脂糖溶液倾倒于大小适宜的水平玻板上，其厚度约3mm，静置，待凝胶凝固成无气泡的均匀薄层后，于琼脂板负极端的1/3处打孔，孔径2~3mm。置含有巴比妥缓冲液(pH8.6)的电泳槽架上，测定孔加适量供试品溶液和一滴溴酚蓝指示液。用3层滤纸搭桥与巴比妥缓冲液(pH8.6)接触，100v恒压条件下电泳2小时（指示剂迁移到前沿）。电泳结束后，用0.5%氨基黑溶液溶液染色，再用脱色液脱色至背景无色。 【附注】 也可用自动、半自动设备及配套试剂，按其使用说明书操作。