乙型肝炎表面抗原（HBsAg）检测（酶联法）规程.docx

乙型肝炎表面抗原（HBsAg）检测（酶联法）规程 原理 用抗-HBs单克隆抗体包被的酶标反应板，加入供试品，同时加入多克隆抗-HBs-HRP。供试品中存在HBsAg时，该HBsAg与包被的抗-HBs抗体结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP复合物。加入底物产生显色反应，颜色深浅与样品中HBsAg含量成正比，在酶标仪上读取各孔的光吸收OD值。根据供试品的OD值进行结果判定。 试剂 乙肝表面抗原检测试剂盒应为有正式批准文号，且经国家药品生物制品检定机构检定合格的体外诊断试剂，并贴有防伪标签，在有效期内使用。 仪器设备 洗板机、酶标仪、恒温孵育箱。 测定法 操作步骤按试剂盒说明书进行。以某公司生产的《酶免疫法测定乙型肝炎表面抗原试剂盒》的测定步骤为例。 （1）每孔加入供试品50μl，设阴、阳对照各2孔，每孔加入阴性对照(或阳性对照)各50μl，并设空白对照1孔。每孔加入酶结合物50μl (空白对照孔除外)，充分混匀，取新封板膜覆盖微孔板，置37℃孵育60分钟。洗涤液用实验用水稀释25倍。孵育完毕，撕弃封条，用配制好的洗涤液洗板。每孔注满洗涤液（不少于300μl），静置5秒钟吸干，反复洗涤5次(如有需要可适当增加洗涤次数)，拍干。 （2）每孔加底物液100μl（底物溶液配制：将每瓶显色剂溶解于5ml底物缓冲液中，混匀避光存放，用前应检查溶液是否变黄，若发生变色应重新配制），取新封板膜覆盖微孔板，置37℃孵育15分钟。孵育完毕，撕开封条，每孔加入终止液50μl，混匀。 （3）在酶标仪上，取波长492nm，参考波长630nm比色，先用空白对照孔校零，然后读取各孔OD值。打印检测结果 结果判断 样品OD值/阴性对照平均OD值≥2.1判断为阳性，否则为阴性。阴性对照OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。 复检 初检阳性的样品需用同厂家、同批号的检测试剂进行双孔复检。操作步骤按试剂使用说明书操作。按试剂使用说明书进行复检结果判断。复检孔均为阴性则判为阴性，结果以复检孔平均OD值计算；复检孔有1孔或1孔以上为阳性，则判为阳性，结果以阳性孔的平均OD值计算。 【附注】 （1）试剂盒应置2～8℃中避光保存，在有效期内使用。不同批号的试剂不可混用。 （2）试剂盒和供试品在使用前应置室温平衡30分钟。 （3）使用前试剂应摇匀，显色剂在加底物缓冲液后应充分混匀。显色剂启封后一次用完。 （4）封板膜不能重复使用。 （5）配制的底物液若显淡黄色，不得使用。 （6）结果判断须在反应终止后20分钟内完成。 （7）供试品不可用NaN3防腐。如供试品需稀释，应用小牛血清稀释。 （8）孵育反应板温度和时间应严格控制。