第3讲 燃料乙醇.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * ? 木糖自然发酵 ? 乙醇耐受性低 树干毕赤酵母Pichia stipitis Xylose Xylitol Xylulose X-5-P PPP and Glycolysis 乙醇 XYL1 XYL2 XYL3 酿酒酵母S. cerevisae Xylose Xylitol Xylulose X-5-P PPP and Glycolysis 乙醇 ? 经过工程应用考验 ? 乙醇耐受性强 XYL1--木糖还原酶(XR) XYL2--木糖醇脱氢酶(XDH) XYL3--木酮糖激酶(XK) 3. 中间代谢物的流失 2. 辅酶因子再生 5. 副产物抑制 1. 低摄取率 XYL XOH XUL XYL XOH XUL X-P GLY ETOH 乙酸 细胞质 外部基质 4. 好氧代谢 CHO C-OH C=O CHO C-OH C=O P XR XDH XK NADPH NADP+ NADH NAD+ 酿酒酵母S. cerevisiae工程菌株发酵木糖主要制约因素 XYL:木糖 XOH:木糖醇 XUL:木酮糖 线粒体 （1）木糖运输障碍 在酿酒酵母中，木糖的吸收主要是通过高亲和力葡萄糖运输因子进行，因此，葡萄糖的存在可以强烈抑制木糖发酵酵母菌株对木糖的吸收 酿酒酵母S. cerevisiae工程菌株发酵木糖低效的主要原因 [Glucose Xylose] [Cellobiose Xylose] [Ethanol] [Ethanol] 木质纤维素 预处理 半纤维素 乙醇 Time S. cerevisiae DA24-16BT3 Time Ha et al. PNAS, 108:504-509 纤维素 木糖 木糖 木糖醇 木酮糖 PPP EMP 纤维二糖 葡萄糖 S. cerevisiae 戊糖已糖共代谢途径 酿酒酵母S. cerevisiae工程菌株发酵木糖低效的主要原因 （2）有氧呼吸与氧化还原平衡对木糖代谢的影响 木糖还原酶对辅酶因子NADPH的亲和力远远高于对NADH 的亲和力，但随后的木糖醇脱氢酶却需要以NAD+为辅因子， 酵母菌株只能在有氧条件下利用木糖，但乙醇的产生则需要厌氧条件。 酿酒酵母S. cerevisiae工程菌株发酵木糖低效的主要原因 （3）低效PPP代谢途径 TAL1和TKL1在酵母菌的表达水平低于其在树干比赤酵母中的表达。 XI: 木糖异构酶 XR: 木糖还原酶 XDH: 木糖醇脱氢酶 XK: 木酮糖激酶 酿酒酵母不能利用木糖，但可以利用其异构体木酮糖，因此，为了使酵母能够利用木糖，需要引入异源的转化木糖为木酮糖的途径 木糖发酵产乙醇途径 木糖异构酶XI研究 异源XI在酿酒酵母中的功能表达研究已延续了20多年 高水平表达真菌XI的酿酒酵母研究 为改进基于XI的木糖利用而进行的代谢工程研究 为改进基于XI的木糖利用而进行的进化工程研究 预处理 糖化 （水解） 发酵 Plant Biomass ETHANOL nzymes (Cellulase b-Glucosidase) 纤维乙醇研究——一条漫长而曲折的路 蛋白质组学 组学 Discovery-driven 转录组学 代谢组学 通量组学 DNA芯片技术 二维电泳/质谱技术 多维色谱/质谱技术 同位素-核磁共振技术 计算生物学 基因组模型化技术 实验生物科学 Hypothesis-driven 分子遗传学 分子微生物学 蛋白质工程 结构生物学 代谢工程 重组DNA 技术 蛋白质结晶及 晶体衍射技术 酶的定向 进化技术 高通量 筛选技术 微生物生理学 反向代谢 工程技术 从基因组 到产品 纤维乙醇研究涉及的技术途径 * * * * * * * * * * * * * * * * * * The DOE National Renewable Energy Laboratory has developed projections based on a working pilot plant for the various costs of a current cellulosic biorefinery. The bars on the right illustrate the cost factors, about a third of which is associate with feedstock and others as indicated. The bar to the left indicates the cost recovery associate with burning lignin and electrica