金属离子螯合层析精编.pptVIP

金属离子亲和层析的应用 成员:曾红唐欢宋梦然 陈雨竹汪客玉三 目录 1、亲和层析 2、金属离子亲和层析 3、金属离子亲和层析的应用 4、金属离子亲和层析的局限 亲和层析 亲和层析是利用配基、配体之间专一可逆 结合性质进行物质分离的方法,因此其专一性、 选择性是极高的。 C∑ 样品 载体 配基固定化 软体: 十杂质 吸附样品 棒敲解析 图81亲和层析的原理 作用機理: (2) (3 X B Elution 阅A●●·●A Washing A Sample 親和基團 固相擔体 X B◆令 亲和层析的过程 1、寻找可与底物专一可逆结合的配基 2、将配基通过共价键偶联到基质,并要求偶 联后配基与配体的亲和力不变 3、配基与配体吸附并与杂质分离,将杂质洗 出 4、洗脱目标物 亲和层析的分类 1、生物亲和层析 2、免疫亲和层析 3、金属离子亲和层柝 4、有机染料亲和层析三 5、拟生物亲和层析 金属离子亲和层析(IMAC) 金属离子亲和层析是建立在蛋白质表面的 氨基酸与固定化金属离子的亲和力的不同来 进行蛋白质分离的项技术 金属离子:锌、铜、铁等 氨基酸:组氨酸的咪唑基、半胱氨酸的巯基、 色氨酸的吲哚基 金属离子亲和层析优点 1、配基简单,吸附容量大 2、价格便宜,投资低 3、通用性强 4、分离条件温和 5、金属离子配基具有很好的稳定性,且层析柱可 长期连续使用,易于再生 、用于分离纯化变性蛋自 金属螯合亲和层析复性中,蛋白质 能可逆吸附在固相介质上,可避免伸展的多 肽分子之间形成聚集体。在高浓度变性剂存 在的情况下,组氨酸尾仍旧具有吸附在金属 螯合亲和层析介质上的能力,所以可在 IMAC介质上同时实现复性与纯化。蛋白质 吸附在IMAC介质上后,先逐步降低变性剂 的浓度,使蛋白质折叠,然后提高咪唑浓度 把折叠后的蛋白质洗脱出来。对于TNF蛋白 使用IMAC获得了90%的复性收率。