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生物技术一班发酵工程实验计划方案
一、实验日程表
序号 实验项目 时间 实验内容安排
1、 固体培养基配制 500mL/ 组，分装 2 瓶；
2 、 培养皿清洗及包扎 10 副/ 组；无菌水 90mL/瓶， 9 mL/ 试管
培养基制 预计 8 学
1 共 6 支；
备与灭菌 时
3 、 1 mL or2 mL 吸管包扎 8 支/ 组；
4 、 液体培养基制备： 500ml/ 组，分装 8 瓶，灭菌 0.1MPa,20min.
1、菌种的分离纯化 : 超净工作台消毒（ UV照射 20min ）→ 75%乙
预计 4 学 醇擦拭台面；分离样品→无菌水溶解 ( 稀释 10-2 倍 ) →涡旋震荡
2 菌种分离
时 5min ；倒平板 (10 副平皿 / 组 ) →平板划线分离→ 30 ℃倒置培养→
目标菌株获得→制片及观察（显微摄影） 。
1、接种准备工作：超净工作台消毒 （UV照射 20min ）→75%乙醇
擦拭台面。
预计 4 学 2 、纯种培养接种：平板单一菌落→种子培养基（ 2 环/ 瓶）→涡
3 种子制备
时 旋震荡 3-5min ；
3 、摇瓶培养：摇床设置及调节（ 30 ℃， 200r/m ）→摇瓶固定→
启动培养。
1、 发酵培养基配制： 20Lor35L 。
2 、 发酵罐操作培训： 发酵罐初始状态检查及调节→清洗 （清水
冲洗 2-3 遍）→发酵罐运行启动→发酵罐运行参数设置→空
发酵罐结
罐灭菌（ 0.15MPa,20min ）→进料→实罐灭菌（ 0.1MPa 维持
构认识、操
30min ）→冷却→火焰封口接种→发酵参数稳定状态调节与
作规程及
维持。
分批发酵 预计 8 学
4 3 、 发酵取样：取样管灭菌→取样→再灭菌；
操作 时
4 、 发酵中间过程分析 （0 hour ）： pH 测定 （pH 计 or 精密试纸） ；
酸度 （中和法）；酶浓度测定 （福林酚法）；菌体浓度测定 （A600
光密度法）
5 、 中间取样：每间隔 4h, 取样管灭菌→取样→再灭菌 . 共计
4-6
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