大豆多肽联合植物乳杆菌对小鼠肠道菌群及免疫力的 影响.pdf

摘要 摘 要 大豆多肽具有降低血压、提高免疫力、抗氧化及调节肠道菌群等多重作用， 应用前景极为广阔。植物乳杆菌作为人体肠道中定植的一种天然、安全、高效的 益生菌，在抑制有害菌繁殖，维持肠道菌群平衡方面发挥重要作用。目前，关于 大豆多肽和植物乳杆菌对机体健康的影响多为单独作用的研究，而二者联合作用 的研究未见报道。本研究拟以大豆多肽和植物乳杆菌为研究对象，先通过体外试 验评价大豆多肽对植物乳杆菌的益生性能，再通过动物试验研究大豆多肽联合植 物乳杆菌对小鼠肠道菌群及免疫调节作用的影响，以期为二者的联合应用提供参 考依据。结果如下： 1. 不同酶制备大豆多肽适宜条件的筛选：本研究以植物乳杆菌的生长状况为 参考指标，通过单因素试验和正交实验优化出了碱性蛋白酶、胰蛋白酶和中性蛋 白酶制备大豆多肽的水解条件 。碱性蛋白酶添加量 （E/S ）9.0% 、底物浓度 0.075 g/mL 、pH 值 9.0、温度 45 ℃、水解 3 h 制备大豆多肽，此时植物乳杆菌的 9 生长数量为 2.39 ×10 cfu/mL ，较对照组，菌落数提高了 58.15%，较水解因素优 化前，菌落数提高了 21.33% 。中性蛋白酶添加量 （E/S ）9.0% 、底物浓度 0.075 g/mL 、pH 值 7.0、温度 50℃、水解 3 h 制备大豆多肽，此时植物乳杆菌的生长 9 数量为 2.32 ×10 cfu/mL ，较对照组提高了 56.89% ，较水解因素优化前提高了 24.13% 。胰蛋白酶在添加量 （E/S ）10.0% 、底物浓度 0.050 g/mL 、pH 值 7.5、 9 温度 35℃、水解 2 h 制备大豆多肽，植物乳杆菌的生长数量为 2.25 ×10 cfu/mL ，较对照组提高了 55.56% ，较水解因素优化前提高了 10.22% 。通过体外 培养试验证实了大豆多肽具有显著的增殖植物乳杆菌的益生作用，显示出大豆多 肽潜在的益生元功能。 2. 大豆多肽联合植物乳杆菌对小鼠肠道菌群的影响：采用 Illumina MiSeq 高 通量技术对小鼠粪便细菌 16S rRNA V3-V4 区进行测序，分析小鼠肠道粪便菌群 的多样性及物种结构组成情况，以探究大豆多肽联合植物乳杆菌对小鼠肠道菌群 的影响。对小鼠肠道菌群多样性进行分析，结果表明大豆多肽联合植物乳杆菌能 够提高小鼠肠道菌群多样性及丰富度，且显著优于二者单独作用。对小鼠肠道菌 群结构进行分析，各组小鼠肠道菌群主要由厚壁菌门和拟杆菌门组成，且厚壁菌 门为第一优势菌群；进一步分析表明，大豆多肽联合植物乳杆菌能够增加乳杆菌 属、毛螺旋菌属、罗斯氏菌、瘤胃球菌属 、劳特氏菌属、普雷沃 氏菌属、 Muribaculaceae 、阿曼克氏菌属等有益菌属的相对丰度，抑制并降低了链球菌 I 摘要 属 、 葡 萄 球 菌 属 、 志 贺 埃 希 氏 菌 属 、 不 动 杆 菌 属 、 螺 杆 菌 属 、 norank_f_Desulfovibrionaceae 及肠杆菌属等有害菌的繁殖，其中胰蛋白酶制备的 大豆多肽联合植物乳杆菌对增加有益菌群的相对丰度效果较好。 3. 大豆多肽联合植物乳杆菌对小鼠免疫水平的影响：通过对小鼠免疫器官指 数、碳粒廓清实验、耳朵肿胀法、半溶血指数值 （HC50 ）、溶血分光光度法研 究了大豆多肽联合植物乳杆菌对小鼠免疫器重量、巨噬细胞的吞噬能力、迟发型 变态反应、溶血素水平及抗体细胞生成数量的影响。结果表明，大豆多肽联合植 物乳杆菌能够显著增强小鼠非特异性免疫、细胞免疫及体液免疫，且不同蛋白酶 制备的大豆多肽与植物乳杆