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摘要
摘 要
大豆多肽具有降低血压、提高免疫力、抗氧化及调节肠道菌群等多重作用,
应用前景极为广阔。植物乳杆菌作为人体肠道中定植的一种天然、安全、高效的
益生菌,在抑制有害菌繁殖,维持肠道菌群平衡方面发挥重要作用。目前,关于
大豆多肽和植物乳杆菌对机体健康的影响多为单独作用的研究,而二者联合作用
的研究未见报道。本研究拟以大豆多肽和植物乳杆菌为研究对象,先通过体外试
验评价大豆多肽对植物乳杆菌的益生性能,再通过动物试验研究大豆多肽联合植
物乳杆菌对小鼠肠道菌群及免疫调节作用的影响,以期为二者的联合应用提供参
考依据。结果如下:
1. 不同酶制备大豆多肽适宜条件的筛选:本研究以植物乳杆菌的生长状况为
参考指标,通过单因素试验和正交实验优化出了碱性蛋白酶、胰蛋白酶和中性蛋
白酶制备大豆多肽的水解条件 。碱性蛋白酶添加量 (E/S )9.0% 、底物浓度
0.075 g/mL 、pH 值 9.0、温度 45 ℃、水解 3 h 制备大豆多肽,此时植物乳杆菌的
9
生长数量为 2.39 ×10 cfu/mL ,较对照组,菌落数提高了 58.15%,较水解因素优
化前,菌落数提高了 21.33% 。中性蛋白酶添加量 (E/S )9.0% 、底物浓度 0.075
g/mL 、pH 值 7.0、温度 50℃、水解 3 h 制备大豆多肽,此时植物乳杆菌的生长
9
数量为 2.32 ×10 cfu/mL ,较对照组提高了 56.89% ,较水解因素优化前提高了
24.13% 。胰蛋白酶在添加量 (E/S )10.0% 、底物浓度 0.050 g/mL 、pH 值 7.5、
9
温度 35℃、水解 2 h 制备大豆多肽,植物乳杆菌的生长数量为 2.25 ×10
cfu/mL ,较对照组提高了 55.56% ,较水解因素优化前提高了 10.22% 。通过体外
培养试验证实了大豆多肽具有显著的增殖植物乳杆菌的益生作用,显示出大豆多
肽潜在的益生元功能。
2. 大豆多肽联合植物乳杆菌对小鼠肠道菌群的影响:采用 Illumina MiSeq 高
通量技术对小鼠粪便细菌 16S rRNA V3-V4 区进行测序,分析小鼠肠道粪便菌群
的多样性及物种结构组成情况,以探究大豆多肽联合植物乳杆菌对小鼠肠道菌群
的影响。对小鼠肠道菌群多样性进行分析,结果表明大豆多肽联合植物乳杆菌能
够提高小鼠肠道菌群多样性及丰富度,且显著优于二者单独作用。对小鼠肠道菌
群结构进行分析,各组小鼠肠道菌群主要由厚壁菌门和拟杆菌门组成,且厚壁菌
门为第一优势菌群;进一步分析表明,大豆多肽联合植物乳杆菌能够增加乳杆菌
属、毛螺旋菌属、罗斯氏菌、瘤胃球菌属 、劳特氏菌属、普雷沃 氏菌属、
Muribaculaceae 、阿曼克氏菌属等有益菌属的相对丰度,抑制并降低了链球菌
I
摘要
属 、 葡 萄 球 菌 属 、 志 贺 埃 希 氏 菌 属 、 不 动 杆 菌 属 、 螺 杆 菌 属 、
norank_f_Desulfovibrionaceae 及肠杆菌属等有害菌的繁殖,其中胰蛋白酶制备的
大豆多肽联合植物乳杆菌对增加有益菌群的相对丰度效果较好。
3. 大豆多肽联合植物乳杆菌对小鼠免疫水平的影响:通过对小鼠免疫器官指
数、碳粒廓清实验、耳朵肿胀法、半溶血指数值 (HC50 )、溶血分光光度法研
究了大豆多肽联合植物乳杆菌对小鼠免疫器重量、巨噬细胞的吞噬能力、迟发型
变态反应、溶血素水平及抗体细胞生成数量的影响。结果表明,大豆多肽联合植
物乳杆菌能够显著增强小鼠非特异性免疫、细胞免疫及体液免疫,且不同蛋白酶
制备的大豆多肽与植物乳杆
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