- 1、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 5、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
第三章 蛋白质及酶工程 本章主要内容: 第一节 概述 第二节 基因诱变技术 第三节 蛋白质的改造 第一节 概述 2.1.2 蛋白质工程的概念 蛋白质工程(Protein Engineering)是在对蛋白质的氨基酸序列、结构和功能进行理化及生物分析的基础上,采用基因工程技术对蛋白质进行修饰、改造以提升其功能效率,甚至创造出新的功能蛋白质的技术。 结构分析: X-射线晶体衍射技术 核磁共振(NMR) 蛋白质结构预测与分子设计: 根据未知蛋白质氨基酸一级结构序列分析,利用计算机信息技术,比较同源蛋白质的结构,按分子动力学、分子力学原理和算法,建立蛋白质的立体模型,并依据结构与功能关系研究成果,对蛋白质分子进行合理化改进设计。 蛋白质的分子量及等电点 用DNA Tool 5.1软件分析了Elymus sibiricus ATPase α亚基的分子量和等电点,推测蛋白质的分子量为55.5 kDa,等电点为6.22。 蛋白质的疏水区预测 蛋白质的修饰位点分析 蛋白质二级结构分析 蛋白质三级结构推测及保守结构域分析 蛋白质三级结构推测及保守结构域分析 低温胁迫不同时段atpA基因表达水平的RNA印迹结果 第二节 基因诱变技术 诱变技术 物理诱变: 化学诱变: 基因定向诱变: 第三节 蛋白质的改造 2.3.1蛋白质的定点改造 酶活性、稳定性、最适PH、特异性 药品的改造:白细胞介素2的半胱胺酸变为丝氨酸或丙氨酸,活性增强,稳定性提高。 2.3.2其他改造方法:四级结构改造、限制性内切酶的改造 第四节 酶工程 4.1概念 4.2酶的生产 4.3酶的固定化技术 4.4酶反应器 4.5生物传感器 4.1概念 4.1.1酶学基础 酶是一种生物大分子,主要是蛋白质,它能催化有机体各种生物化学反应,使新陈代谢活动得以有序地进行 酶的特性:? 高效性,专一性,可控性 影响酶活性的因素:?温度、pH、底物与产物浓度、变构作用 4.2酶的生产 4.2.1酶的微生物发酵生产 微生物产酶的优点:产量高,活性高;容易培养;微生物酶类齐全,易改造。 生产方法与培养基。 提高酶产量的措施:添加诱导物;降低阻遏物浓度;使用表面活性剂;添加产酶促进剂。 4.4 酶反应器 利用酶进行催化反应加工物料的容器即酶反应器 4.1.2酶工程(Enzyme Engineering) 是从应用的目的出发研究酶、应用酶的特异性催化功能,并通过工程化将相应原料转化成有用物质的技术。 酶工程主要有以下几个方面的研究内容: ①酶的分离、提纯、大批量生产及新酶和酶的应用开发; ②酶和细胞的固定化及酶反应器的研究(包括酶传感器、反应检测等); ③酶生产中基因工程技术的应用及遗传修饰酶(突变酶)的研究; ④酶的分子改造与化学修饰、以及酶的结构与功能之间关系的研究 ⑤有机相中酶反应的研究; ⑥酶的抑制剂、激活剂开发及应用研究; ⑦抗体酶、核酸酶的研究; ⑧模拟酶、合成酶及酶分子的人工设计、合成的研究。 4.2.2酶的分离纯化 细胞收集、破碎 溶剂抽提 浓缩 过滤 离心 干燥 步骤: 纯化精制:离心、透析、过滤、层析、电泳 4.2.2酶的保存 目的:保持酶的稳定性和活性 溶液保存 晶体或干粉保存 固定化酶,是指限制或固定于特定空间位置的酶。经物理或化学方法处理,使酶变成不易随水流失即运动受到限制,而又能发挥催化作用的酶制剂。制备固定化酶的过程称为酶的固定化。固定化所采用的酶,可以是经提取分离后得到的有一定纯度的酶,也可以是结合在菌体(死细胞)或细胞碎片上的酶或酶系。 4.3酶的固定化技术 固定化酶优点 ①可以多次使用,而且在多数情况下,酶的稳定性提高。 ②反应后,酶与底物和产物易于分开,产物中无残留酶,易于纯化,产品质量高。 ③反应条件易于控制,可实现转化反应的连续化和自动控制。 ④酶的利用效率高,单位酶催化的底物量增加,用酶量减少。 ⑤比水溶性酶更适合于多酶反应。 固定化酶的制备技术 (1)吸附法制备固定化酶技术 是利用载体表面性质作用将酶吸附于其表面的固定化方法,又分为物理吸附法和离子交换吸附法。 (2)包埋法制备固定化酶技术 包埋法又分为凝胶包埋法和微囊化包埋法两类。凝胶包埋法是将酶或细胞限制于高聚物网络中的技术;微囊化是将酶或细胞定位于不同构型的膜外壳的技术。 (3)交联法制备固定化酶技术 交联酶法是向酶液中加入多功能试剂,在一定的条件下使酶分子内或分子间彼此连接成网络结构而形成固定化酶的技术。 其优点在于: ①无需进行酶的分离纯化。 ②细胞保持酶的原始状态,固定化过程中酶的回收率高。 ③细胞内酶比固定化酶稳定性更高。 ④细胞内酶
您可能关注的文档
最近下载
- 2025年库伦分析法考试题及答案.doc VIP
- 永嘉县民办教育机构房屋使用安全状况排查表(一幢一表).doc VIP
- 第一电通螺丝拧紧机中文说明书.pdf VIP
- 现代大学英语第二版听力1课后习题答案.pdf
- 电子社Altium Designer 22(中文版)电子设计速成实战宝典教学课件第5章-原理图开发环境及设计.pptx VIP
- 触摸屏与PLC对机械手的控制毕业(设计)论文.doc VIP
- 金刚石单晶片 X 射线双晶摇摆曲线半高宽测试方法.docx VIP
- 默纳克3000new系统调试与运行举例资料.pdf VIP
- 天津国企考试题型有哪些.pdf VIP
- 2024学校病媒生物防制工作实施计划方案.docx VIP
文档评论(0)