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陕西师范大学 生命科学 学院 生物技术 专业2011届本科生毕业论文（设计）开题报告 姓名 孙驰 学号论文（设计）题目 激活标签载体pSKI074的转化与鉴定 选题的意义： 激活标签技术（activation tagging）是以获得功能突变体为研究对象，在 植物功能基因组学的研究中具有重要的作用，其原理是利用增强子会激活邻近 上下游基因的表达，从而产生激活标记突变。质粒转化受体菌的是进行下游分 子生物学实验的基础，也是利用农杆菌转化法获得突变植株的先决条件，本文 就pSKI074激活标签载体的转化大肠杆菌（DH5x ）、农杆菌（GV3101以及菌 落鉴定做以简要阐述。 研究综述（前人的研究现状及进展情况）： 激活标签技术是在T — DNA插入法的基础上发展而来的一种技术，现在已比 较成熟，在拟南芥突变体库的建立过程中发挥了重 要作用，人们常用的是 PSKI015质粒载体，pSKI015向农杆菌中转化的方法都很成熟，转化率也较高， 但应用pSKI074质粒的还很少。 论文（设计）写作提纲（除题目外，具体到三级标题） 1材料和方法 1.1材料 1.1.1菌株、质粒 培养基 1.1.3试剂及其他 DH5 a感受态的制备 pSKI074 转化 DH5x DH5 a中pSKI074质粒DNA分子的提取及检测 pSKI074 质粒 DNA分子转化 GV3101 1.6菌落PCR佥测 2结果 2.1 DH5 a转化结果 2.2质粒DNA分子电泳结果 2.3 GV3101转化结果 2.4菌落PCR吉果 3讨论 特色与创新之处： 本实验首次使用pSKI074质粒做载体。 本实验将热休克法与液氮冻融法做了对比 本实验可为以后丹参突变体库的建立奠定基础 拟采用的研究方法和技术路线： 米用CaCl2法制备大肠杆菌和农杆菌感受态 采用热休克法转化大肠杆菌 采用液氮冻融法转化农杆菌 用菌落PCF检测质粒的存在 用-80度冰箱保存菌种 研究工作进度安排： 查阅文献 制定初步实验计划让老师指导不足 根据老师的指导完善实验过程 准备器材购买质粒、菌种 开始实验 DH5x感受态的制备 pSKI074 转化 DH5a DH5x检测及质粒提取 GV3101感受态的制备 pSKI074 转化 GV3101 GV3101检测 6 ?撰写论文 主要参考文献目录： Walde n R,Fritze K,Hayashi H,et al.Activatio n taggi ng:a mea ns of isolating genes implicated asplaying a role in plant growth and development[J].PIant Molecular Biology , 1994, 26: 1521-1528. 韩斌，植物功能基因组研究[J].中国科学院院刊，2003 (4) ,4 250 — 254. 薛建平，司怀军，田振东.植物基因工程[M].中国科学技术大学出版社 2008-06. 滕瑛珏,高蕴秀,碳青霉烯类抗生素临床合理应用探讨，中华全科医学2009 年10月第7卷第10期. Gu e gan C, Braudeau J, Couriaud C, et a.l PTD -XIAP protects against cerebral ischemia by anti-apoptotic and transcriptional regulatory mecha nisms[J].NeurobiolDis, 2006, 22(1): 177-186. ⑹ 关传江，穆可虎.宫颈癌p16基因甲基化研究新方法[J].实用全科医学， 2008, 6(1): 3-5. 张果,昌晓红,石菁菁,等.卵巢癌抗独特型单链抗体 6B11ScFv与鼠HSP70 融合蛋白的构建、表达及鉴定[J].中国医药生物技术,2008, 3(5): 336-342. 金文辉,郭焱,崔健丽,等.人卵GST-ZP3融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯 化及其免疫原性的检测[J].中国妇幼保健,2008, 23(23): 3311-3314. 王景雪,孙毅.农杆菌介导的植物基因转化研究进展[J].生物技术通 报,1999(1):7-13. 宋婷，盐芥激活标记突变体库的构建[D].济南：山东师范大学，2005. 刘卫今，蒋勇，完迪迪.简单高效的感受态细胞制备和质粒转化体系的建 立[J],安徽农业科学，2008,36(7):2745-2746. Gennady V.Pogorelko,Oksana V.Fursova. A new technique for activation tagging in Arabidopsis[J], Gene 414(2008)67