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细菌计数参考材料 一、检样稀释　　 1、以无菌操作用 1mL 灭菌吸管吸取 1∶10 稀释液 1mL，注入含有 9mL 灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成 1∶100 的稀释液。　 2、另取 1mL 灭菌吸管，按上条操作依次做 10 倍递增稀释液，每 递增稀释一次，换用 1 支 1mL 灭菌吸管。　 3、根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个 稀释度，每个稀释度接种 3 管。 二、基本原理 　　平板菌落计数法是根据微在固体培养基上所形成的一个菌落 是由一个单繁殖而成的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个单。 计数时，先将待测样品作一系列稀释，再取一定量的稀释菌液接种到 培养皿中，使其均匀分布于平皿中的培养基内， 培养后，由单个生 长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品中的含菌数。 　　这种计数法的优点是能测出样品中的活菌数。 三、器材 　　大肠杆菌悬液，牛肉膏蛋白胨培养基， 1ml 无菌吸管，无菌平 皿，盛有 9ml 无菌水的试管，试管架和记号笔等。 四、操作步骤 　　 1、编号： -6 -7 取无菌平皿 9 套，分别用记号笔标明 10 、10 各 2 套。另取 7 支 -1 -2 -3 盛有 9ml 无菌水的试管，排列于试管架上，依次标明 10 、10 、10 、 -4 -5 -6 －7 10 、10 、10 、10 。 2、稀释 -1 　　用 1ml 无菌吸管精确地吸取 1ml 大肠杆菌悬液放入 10 的试 管中，注意吸管尖端不要碰到液面，另取 1 支吸管将管内悬液来回吸 吹三次，吸时伸入管底，吹时离开水面，使其混合均匀。换一支吸管 -1 -2 自 10 试管吸 1ml 放入 10 试管中，吸吹三次，……其余依次类推。整 个稀释过程如 图Ⅷ-3 。 　　3、取样 -6 -7 　　用 3 支 1ml 无菌吸管分别精确地吸取 10 、10 的稀释菌液 0．1ml，对号放入编好号的培养皿中。 　　4、计数 　　培养 24 小时后，取出培养皿，算出同一稀释度三个平皿上的 菌落平均数，并按下列公式进行计算： 　　每毫升中总活菌数=同一稀释度三次重复的菌落平均数×稀释 倍数×10 　　一般选择每个平板上长有 30—300 个菌落的稀释度计算每毫 升的菌数最为合适。同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊。 -6 -7 由 10 、10 两个稀释度计算出的每毫升菌液中总活菌数也不能相差 悬殊，如相差较大，表示试验不精确。 　　平板菌落计数法，所选择倒平板的稀释度是很重要的，一般以 三个稀释度中的第二稀释度倒平板所出现的平均菌落数在 50 个左右 为最好。 　　平板菌落计数法的操作是先将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化 后倒平板，待凝固后编号，并于 37℃温室中烘烤 30 分钟左右，使其 干燥，然后用无菌吸管吸取 0.1ml 菌液对号接种于不同稀释度编号的 培养皿中的培养基上，再用无菌玻璃刮棒将菌液在平板上涂布均匀， 平放于台上 20—30 分钟，使菌液渗透入培养基内，然后再倒置于 37℃的温室中培养。 五、无菌操作的基本要求 1、试验开始前，应以湿式方