药物急性毒性实验.docVIP

实验一 药物急性半数致死量（LD50）的测定 【目的】 了解药物半数致死量(LD50)测定的意义、原理，掌握半数致死量的测定方法和计算过程。 【原理】 LD50是指在一群动物中能使半数动物死亡的剂量。由于实验动物的抽样误差，药物的致死量对数值大多在50％质反应的上下呈正态分布。在这样的质反应中药物剂量和质反应间呈S型曲线，S型曲线的两端处较平，而在50％质反应处曲线斜率最大，因此这里的药物剂量稍有变动，则动物的死或活的反应出现明显差异，所以测定半数致死量能比较准确地反映药物毒性的大小。 【实验材料】 动物：小白鼠，体重18-24g，雌、雄各半，实验前禁食12小时，不禁水。 药品：盐酸普鲁卡因，苦味酸。 器械：小鼠笼，天平，注射器（1mL），电子计算器。 【方法和步骤】 （一）预备实验 1、探索剂量范围： 先找出100%及0%死亡的剂量，此即上下限剂量（Dm及Dn）。方法是先取出小鼠9-12只，每组3只，按估计量（根据经验或文献资料定出）给药，如3只小鼠全死则降低剂量一半，如全不死则增加剂量一倍，如部分死亡，则按2：1的比例向上、向下调整剂量，由此找出上下限剂量。 2、确定组数，计算各组剂量： 确定组数（G）：可根据适宜的组距确定组数，一般分5-8个剂量组。 计算各组剂量：要求各组剂量按等比级数排列，在找出Dm及Dn和确定组数后，可按下列公式求出公比r： （G-1 （G-1） Dm/Dn r = Dm/Dn 再按公比计算各组剂量D1,D2,D3,D4,D5……Dm，其中D1=Dn=最小剂量，D2=D1?r; D3=D2?r; D4=D3?r; D5=D4?r; ……DG=DG-1?r。r值一般以1.7~1.15之间为宜。 计算举例：已知某药在致死毒性实验中，Dm=187.5 mg/kg; Dn=76.8 mg/kg, 确定组数G=5，求r及各组剂量。先代入公式求r=1.25，再计算各组剂量D1=Dn=76.8 mg/kg, D2=76.8?1.25=96 mg/kg, 依次计算D3，D4，及DG(D5)分别为120，150，187.5 mg/kg。 3、配制等比稀释药液系列，使每只小鼠给药容量相等，一般为0.1-0.25 mL/10g。母液浓度C= Dm/等容注射量，如某药的Dm=187.5 mg/kg，等容注射量为0.2 mL/10g，则母液浓度C=187.5（mg/kg）/0.2（mL/10g）=0.94%。按此配制母液25mL放入5号小烧杯，即为5号液；从中吸出20 mL 放入4号小烧杯，加水至25mL，即为4号液；再吸出20mL 4号液放入3号杯中，加水至25mL，即为3号液，如此类推，配制出2号液和1号液。 （二）正式实验 1、分组编号：称各小鼠体重，将体重相同小鼠放一笼，分别用苦味酸做好标记。再按确定组数（5组）分层随机分组，使各组平均体重及性别分布尽可能一致，每组一般用小鼠10只（5只雄性，5只雌性）。 1、给药：先计算各体重组小鼠腹腔等容注射药量（0.2mL/10g），取相应的等比稀释药液，给各组小鼠腹腔注射。给药顺序：如分为5组，先按2、3、4组顺序给药，再根据实验结果决定是向下或向上注射。 2、观察记录：给药后观察小鼠中毒表现，记录小鼠死亡数，计算每组死亡率。观察时间可根据药物作用快慢而定，应到小鼠不再因药物作用死亡为止。一般观察时间为24小时，作用快者可观察10—30分钟。本次实验观察时间为30分钟，记录每组剂量和动物死亡数。 【计算LD50及95%可信限】 孙氏改进寇氏法 基本要求 反应情况符合活接近对数正态分布。 相邻两剂量的比值应相等。 各组动物数相等或相近，一般为10只。 不要求死亡率必须包括0％与100％，但二者之和最好在80％－120％范围内。 计算公式 1）当最小剂量组的死亡率为0％，最大剂量组的死亡率为100％时，按下列公式计算： 式中Xm―最大剂量的对数； p―各组动物的死亡率（以小数表示） ∑p―各组动物死亡率的总和（p1+p2+p3……） I―相邻两组对数剂量的差值（大剂量组减小剂量组）。 2）当最小剂量组的死亡率大于0％而又小于30％，或最大剂量组的死亡率小于100％而又大于70％时，可按下列校正公式计算： 式中Pm―最大剂量组的死亡率； Pn―最小剂量组的死亡率。 3）LD50的标准误按下列计算： 式中 n―每组的动物数。 4）LD50的95％可信区间按下式计算： Lg-1(lgLD50±1.96SlgLD50) 2、应用计算软件：点击桌面“LD50”进入计算软件，将各组剂量和死亡数填入，然后点击“运行”，即可算出LD50及95％可