《生物化学与分子生物学》实验教学大纲.docxVIP

《生物化学与分子生物学》实验教学大 纲 （供本科临床医学及临床医学英语班、口腔医学、眼科学、耳鼻咽喉学、 麻醉学、病理诊断学、 医学心理学、临床药学专业使用）  课程名 称：生物化学  课程编号：  实验学时： 48  一、本实验课的性质、任务与目 的生物化学与分子生物学是一门重要的实验性基础医学学科。 生物化学所阐述的是人体物质组成、物质代谢过程、代谢平衡的调控、物质代谢与生理机能之间的关系等内容，是进一步学习其他基础医学科和临床医学课程必备的基础知识。理论知识来源于实践研究，生物化学的实验技术和方法不仅为生物化学的迅速发展创立了条件，也为其它基础医学和临床医学的研究奠定了基础。生物化学实验课是帮助同学掌握基本实验技能、基本实验操作技术，提高独立思考、独立分析和独立解决问题的能力，学会正确的科研思维方法，养成严谨的科学作风，把同学们所学得的生化理论知识和实验内容相结合的重要手段。近代医学的发展经常运用生物化学理论与技术诊断、治疗和预防疾病，许多疾病的发病机制也需要从分子水平加以探讨。特别是近年来，随着生物化学与分子生物学的迅速发展促进了人们对许多疾病如恶性肿瘤、心血管疾病、神经系统疾病、免疫系统疾病等重大疾病的认识，随之出现了基因诊断和基因治疗的方法。由于生化理论是在科学研究实验基础上高度总结的结 论性观点，所以，生化实验课一方面使学生在实验中验证理论 的来源与正确性、加深对理论的理解；另一方面，生物化学实 验手段又是生命科学发展的必用手段，生化实验课是培养学生 科研能力和素质的必要的、重要的过程。 二、本实验课 的基本理论 生物化学实验课主要基于如下基本理论：  ① 分光 光度法及比色分析法基本原理。  ② 离心分离原理。  ③ 酶促反 应动力学理论 ④ 结合酶的作用原理 ⑤PCR 技术及基本原理 ⑥ 蛋白质盐析、有机溶剂沉淀蛋白质、凝胶过滤层析和电泳技术 等有关第蛋白质分离纯化的基本理论。 ⑦ 生物大分子分离、纯 化的一般实验设计相关理论 。 ⑧ 实验误差、数据处理、有效 数字相关理论。 ⑨ 精密度、标准差、变异系数、回收率概念及 理论。 三、实验方式与基本要求 实验一 生化实验基本 操作、蛋白质的盐析作用 1．熟记实验室规则和常用生化仪器 名称。 2．了解分光光度计、离心机等仪器设备的工作原理， 学会正确操作及一般维护。 3．掌握盐析的基本原理、实验方 法和应用。 实验二 血清蛋白质含量的测定 1．掌握 Lowry 比色 法测定蛋白质的基本原理，初步学会实验方法。 2．掌握血清蛋白质含量测定的临床意义。 3. 学会标准曲线 的制做。 实验三 碱性磷酸酶 Km 值的测定 1．加深酶促反应动 力学基本知识的理解和记忆。 2．掌握双倒数法测定酶 Km 值的 原理，学会实验方法。 3. 掌握碱性磷酸酶（ AKP）活性测定 的原理和方法 实验四 血糖含量的测定及激素对血糖浓度的影响 1．掌握人体血糖的正常范围及生理意义。 2．熟记肾上腺素对 血糖浓度的影响并解释其作用机制。 3．了解血糖浓度测定的基本原理、学会测定方法。 实验五 乳酸脱氢酶及其辅酶Ⅰ的作 用 1.掌握结合酶作用特点和原理。2.学会实验动物的取材方法 及组织匀浆制备方法。 实验六 血清谷丙转氨酶活性的测定 1.熟 悉血清谷丙转氨酶活性测定的原理，学会测定方法。 2.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。 实验七 PCR技术体外扩增 DNA 及扩增产物鉴定 1.掌握 PCR技术的原理和方法，了解其应用。 2.掌握琼脂糖凝胶电泳技术分离 DNA 的原理和方法，了解 其应用。 实验八 脲酶的凝胶过滤分离纯化 1.掌握凝胶过滤层析 法的基本原理及应用。 2．学会利用凝胶过滤层析分离蛋白质 的基本方法。 实验九 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质 1．熟悉电泳的基本原理和技术。 2．掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳 分离蛋白质的基本原理和方法，了解其应用。 四、实验项目的设置与内容提要 序实验实验实验要实 验 项 目内容提要号求学时类型 4验证必做①学习生化基本操 作② 学习离 1 生化实验基本操作 性 心机使用 ③ 学习蛋白质盐 析 蛋白质的盐析作用 综合必做 ① 分光分析原理和技术 ②lowry 2 血清蛋白质含量的测定 4 性 比色测定蛋白 ③ 标准曲线制做 综合必做 ①AKP 活性测定 ② 双倒数法测 3 碱性磷酸酶 Km 值的测 4 性 Km③ 米氏方程矩形双曲线测 Km 定 验证必做 ① Folin — 吴氏法测定血糖 4 血糖含量的测定及激素 4 性 ② 观察激素对 血糖浓度影响 对血糖浓度的影响 5 乳酸脱氢酶（ LDH）及 4 验证必做 制备酶蛋白和辅酸 I 提取液，观其辅酶Ⅰ的作用 性 察 二者共同或单独存在的作用 6 血清谷丙转