梭菌属clostridium的检验.docx

梭菌属Clostridium 的检验 ? 该属细菌多数严格厌氧，革兰氏染色阳性，形成芽孢， 芽孢直径往往比菌体粗，使菌体膨胀成梭状，但并非梭 菌属的细菌均为梭状，如破伤风梭菌，芽孢位于菌体顶 端，菌体呈鼓槌状。 ? 该属细菌能产生多种外毒素和侵袭性酶， 致病性强，包 括产气荚膜梭菌、腐败梭菌、诺维梭菌、肉毒梭菌和破 伤风梭菌等。 一、产气荚膜梭菌(Cl. Perfri nge ns ) 旧名魏氏梭菌，在自然界分布很广。 —定条件下，可引起多种严重疾患，局部组织出现坏死、 水肿、产气。 是引起食源性胃肠炎最常见的病原之一， 可引起典型的 食物中毒暴发。由产气荚膜梭菌引起的疾病为魏氏梭菌 中毒。 1、形态及染色特征 革兰氏阳性粗大梭菌，3-4 X 1-1.5卩m单独或成双排列， 有时成短链。芽胞卵圆形，宽度不比菌体大，位于中央或 末端。 培养时芽胞少见，须在无糖培养基中才能生成芽胞。 在脓汁、坏死组织或感染动物脏器涂片可见明显荚膜，无 鞭毛，不能运动。 2、培养特性 本菌虽属厌氧性细菌，但对厌氧程度的要求并不太严。 厌氧程度不如破伤风梭菌要求高。 在普通培养基上能生长，若加葡萄糖、血液，则生长更 好。生长适宜温度为 37?47 C ,多认为43?47 C为最宜本 菌生长温度。繁殖速度极快，在适宜条件下增代时间仅 8min,可利用高温快速培养法对本菌进行选择分离 ，如在 45 C下，每培养3~4h传种1次，即可较易获得纯培养。 2、培养特性 血液琼脂平板：菌落较大、灰白色、不透明，边缘呈 锯齿状，多数菌株有双层溶血环，内环是 B毒素的作用， 而外环不完全溶血是 a毒素所致。 疱肉培养基：肉渣不被消化，有时呈肉红色。 牛乳培养基：分解乳糖产酸，使酪蛋白凝固，同时 生成大量气体，将凝固的酪蛋白冲成海棉状碎块。管内气 体常将覆盖在液体上的凡士林层向上推挤，这种现象称为 “暴烈发酵”，是本菌的特点之一，主要鉴别的指标。 在乳糖、牛奶、卵黄琼脂平板上培养的菌落周围出现乳光 浑浊带。 血平板上，多数菌株有双层溶血环，内环完全溶血，外 环不完全溶血。 3、生化特性 能分解多种糖类，发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、 蔗糖，产酸产气。 分解水杨苷不稳定，不发酵甘露糖 ； 能液化明胶，还原硝酸盐，产生硫化氢; 不产生吲哚，不能消化已凝固的蛋白质和血清。 产生卵磷脂酶（磷酸酶C）分解卵磷脂为磷酰胆碱与非水 溶性甘油二酸酯。上述卵黄琼脂平板菌落周围出现的乳 光浑浊带即属本反应。 由于发酵乳糖菌落周围的培养基颜色发生变化 （中性红 指示剂呈粉红色）,不消化牛奶，不分解游离脂肪，菌落周 围不出现透明环及虹彩层。 4、致病因子与致病性 产气荚膜梭菌既能产生强烈的外毒素， 又有多种侵袭性 酶，并有荚膜，构成其强大的侵袭力，引起感染性疾病。 毒素的毒性虽不如肉毒毒素和破伤风毒素强，但种类 多，有12种外毒素（口3丫$ ￡ n B I k入yv ）和具有 毒性作用的多种侵袭性酶（卵磷脂酶、纤维蛋白酶、透明 质酸酶、胶原酶和 DNA酶），构成强大的侵袭力。 在各种毒素和酶中，以a毒素最为重要，a毒素是一 种卵磷脂酶，能分解卵磷脂，损伤多种细胞的细胞膜， 引起溶血、组织坏死，血管内皮细胞损伤，使血管通透 性增高，造成水肿。 e毒素有溶血和破坏白细胞的作用， 胶原酶能分解肌肉 和皮下的胶原组织，使组织崩解，透明质酸酶能分解细 胞间质透明质酸，有利于病变扩散。 本菌能由消化道或创伤侵入机体内， 引起人类和动物的 多种疾病，其中最重要的是气性坏疽。 根据细菌产生外毒素的种类差别，可将产气荚膜梭菌分 成 A、B、C、D E、F 6 个型： A型：人气性坏疽和食物中毒； B型：羔羊痢疾； C型：绵羊猝死，人坏死性肠炎 D型：牛肠毒血症； E型：犊牛、羔羊肠毒血症。 5、微生物学诊断 直接涂片镜检：G+大杆菌，并有荚膜； 分离培养：接种血平板，有双层溶血环 ； 纯培养：引起牛奶暴烈发酵； ⑷ 动物试验：小鼠、家兔或鸽，出现“泡沫肝”； (5)肠毒素检查：取回肠内容物，加适量灭菌生理盐水稀 释，经离心沉淀后取上清液分成两份，一份不加热，一份 加热，分别静脉注射家兔或小鼠。如有毒素存在，不加热 组动物常于数分钟至数小时内死亡， 而加热组动物不死亡。 二、肉毒梭菌(Cl. botulinum ) 肉毒梭菌是厌氧芽孢杆菌属成员，为严格厌氧菌，是一 种腐物寄生菌。 在自然界中分布广泛，遍布于土壤、江、河、湖、海、 沉积物等中，水果、蔬菜、畜、禽、鱼制品中亦可发现 , 偶尔见于动物粪便中。 一般认为土壤是肉毒梭菌的主要来源。 污染食品主要存在于密闭比较好的包装食品中 ，在厌氧 条件下，产生极其强烈的肉毒毒素。 其毒性作用是目前已知化学毒物和生物毒素中的最为 强烈的一种，比氰化钾的毒力还大 10