昆虫细胞的培养综述.docxVIP

昆虫细胞培养及其应用进展 摘 要 : 随着生命科学的迅速发展 , 细胞工程愈来愈受到人们的重 视。以昆虫细胞为对象的细胞培养技术在现代实验生物学上具有重要 的价值 , 已经广泛地应用于医学、农业及生物学的各个领域。本文综 述了有关昆虫细胞培养的研究进展 , 包括昆虫细胞培养基研究开发 , 昆虫细胞系的建立和组织培养 , 利用生物反应器大规模培养昆虫细 胞, 昆虫细胞 2 杆状病毒表达系统 ,构建基因工程细胞系及其稳定性表达 , 以及昆虫细胞培养的应用前景和研究展望。 关键词 : 昆虫细胞系 ; 昆虫细胞培养 ; 基因表达 ;培养条件 昆虫的组织培养最早始于 1915 年 , 直到 1962 年 Grace 才成功建立了世界上第一个细胞系 , 此后昆虫细胞培养在世界范围内广泛开展 , 不断有新细胞系建立的报道。现在 , 昆虫细胞培养已在细胞生物学、分子生物学、昆虫学、病毒学、生物化学、遗传学等领域的研究工作中发挥着重要的作用。 昆虫细胞培养基 昆虫细胞培养基的发展经历了天然培养基、 合成培养基和无血清 培养基三个阶段 . 天然培养基采用取自动物体液或从组织中提取的 成分作为培养液 . 合成培养基最大的特点是各种成分已知 .无血清培 养基是在已知细胞所需营养物质和贴壁因子基础上 , 在基础培养基中加入适宜的促细胞生长因子 , 能够保证细胞生长良好无须补加血清的培养基 . 昆虫细胞培养基的发展主要是合成培养基的发展 .[1] 体外培养昆虫组织的首创者是 R ichard Ben2dict (1915), 但他当 时没有合适的昆虫细胞培养基。 T rager 首次研究了培养基中昆虫细 胞的生长条件 , 目的是证明单个细胞能在体外存活几天 , 并利用昆虫 细胞培养基研究昆虫和哺乳动物病毒。 1956 年, Silver W yatt 改进了 用于家蚕 (B om byx m ori L innaeus) 蛹的培养基 , 成功地使细胞存活 了 14d。他的培养基含有浓度与家蚕血淋巴成分相应的 21 种氨基 酸、5 种盐、 3 种有机酸、以及果糖、海藻糖和葡萄糖 , 并相应调解 了 pH 值和渗透压 , 这为昆虫细胞培养基的研究奠定了重要的基础。 1956 年就在 W yatt 发表论文时 , Grace 在 W yatt 的培养液中增加了 胆固醇、内分泌腺和卵巢组织的提取物以及含有  10 种  B 族维生素 的混合物  ,  使  4 龄家蚕幼虫的卵巢细胞存活了  29d。从此 ,  昆虫细胞 培养基的研究便迅速发展起来。到目前为止 , 至少已报道了 60 多种 昆虫细胞培养基。许多昆虫培养基配方正不断得到改进 , 以使之适于 细胞生长。最通用的商品培养基 Grace 氏培养基、 TC2100、IPL 241、 TNM 2FH 以及经改良的哺乳动物细胞培养基 TC1992M K 等。 TC2100 适合于苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒在草地贪夜蛾细胞系 (Sf9 细胞系 ) 中生长 , 但它仅适用于实验室而不适用于大规模培养 , IPL 241 提高了昆虫细胞系的生产规模 , 利于杆状病毒的有效生产。 这些培养基是呈液体或粉剂的商品 , 使用时通常补充 5%～ 10% FBS(牛血清 ) 和一些蛋白水解物或抽取等复杂添加剂。 牛血清是细胞 培养中用量最大的天然培养基 , 含有丰富的细胞生长所必要的营养 成分即提供生长因子、脂类、蛋白及无机盐。细胞培养的关键是培养 基配方的开发 , 已有多种培养基用于支持昆虫细胞系的生长。昆虫细 胞培养所用培养基一般均补加 FBS, 血清提供了细胞生长过程中所需的营养物质和微量元素 , 使细胞能健康生长和传代。但是 FBS 的使用也存在着缺点 : ①价格高 ; ②每批血清的质量不同 , 影响细胞的生长和病毒复制 ; ③血清中的蛋白影响从培养的上清液中分离和提 取重组蛋白 , 使蛋白的纯化更加困难 ;④血清易被支原体污染。 由于部分加入胎牛血清或牛血清使典型昆培养基变得很复杂。因此 , 无论工业上或学术上 , 开发无血清培养基都是必然的趋势。昆虫细胞无血清培养基的研究始于 20 世纪 60 年代末和 70 年代初 , 发展无血清培养基 , 必须寻找适当的具有类似于血清功能的因子 , 由于血清成分复 杂, 具有多种促细胞生长和增殖因子 , 因此要找到血清的替代物是相当困难的。目前 , 通常的添加物有酵母自溶物、蛋白胨、胰蛋白胨、蛋黄乳液、酵母抽提物水解乳蛋白及微量元素等。 近年来已先后研制出多种无血清或低蛋白培养基如 SFM 25、CDM 、Sf2900?、Excell400、 ISFM 等, 但缺点是适用范围小。 CDC 培养基的出现 , 打破了无血清 培养基的局限 , 它既可用于双