活体成像实验.pdfVIP

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解螺旋 陪伴医生科研成长 活体成像实验 1. 实验原理 活体成像是指生物体处于活体状态下,在细胞和分子水平上应用多种成像方式对某种生 物行为进行定性或者定量分析研究的方法。与传统的体外成像或切片相比,其有许多优势: 1.可用同一实验对象进行多次处理得到一系列结果,从而排除个体间的差异; 2.能够在正常生理状态下检测活体内生物学活动,可真实模拟生理病理状态; 3.可动态观察处理结果,不需要处死实验对象。 2. 实验目的 活体动物体内光学成像主要采用生物发光(bioluminescence)与荧光(fluorescence) 两种技术。通过两种不同的标记方式,结合更高量子效率CCD 来监测被标记动物体内分子及 细胞等的发展进程。解螺旋/ 3. 实验材料 3.1. 主要试剂(试剂来源仅供参考) 活体动物 3.2.主要仪器 (仅供参考) 仪器名称 来源 型号 法国VilberNEWTON 7.0 小动物 Vilber NEWTON 7.0 活体成像系统 4. 实验步骤 这里以活体成像技术监测肝转移肿瘤为例 (或见肿瘤转移模型) 肿瘤肝转移模型建立: 6 1. 制备表达荧光素酶基因(luciferase)的Lewis 肺癌细胞单细胞悬浮液。1×10 个细胞, 200 μl 体积。 1 解螺旋 陪伴医生科研成长 2. 麻醉6 - 8 周龄雌性裸鼠,体重16-22g。 3. 小鼠仰卧位左侧皮肤上做2-3 厘米长肋下切口。 4. 暴露脾脏,用4-0 缝合线结扎脾脏。在两条结扎线之间分切开,形成两个半个脾脏。 5. 将细胞用27G 针头注射器将100 μL 体积注射入一块脾脏,待细胞转移到肝脏,切除注射 的一半脾脏。一般肿瘤细胞排到肝脏约10 分钟。10 分钟后切除被注射的一半脾脏。另一半 脾放回回腹腔原位置。 6. 缝合皮肤,关闭腹腔。解螺旋/ 7. 分别在0 天,6 天,10 天,14 天荧光素底物,进行活体成像3 分钟。监测肿瘤肝脏转移 生长情况。 活体成像视频:/x/page/q1341qywq1w.html 5. 应用示例文献1,2 1. Zhan Y, Ai F, Chen F, et al. Intrinsically Zirconium-89 Labeled Gd2 O2 S:Eu Nanoprobes for In Vivo Positron Emission Tomography and Gamma-Ray-Induced Radioluminescence Imaging. Small 2016; 12(21): 2872-6. 2. Wang Y, Chen J, Yang B, et al. In vivo MR and Fluorescence Dual-modality Imaging of Atherosclerosis Characteristics in Mice Using Profilin-1 Targeted Magnetic Nanoparticles. Theranostics 2016; 6 (2): 272-86. 2

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