2021年分析光果莸多酚物质抗氧化药效特性.docVIP

2021年分析光果莸多酚物质抗氧化药效特性 多酚类化合物是高等植物中普遍存在的次级代谢产物，具有广泛的生物活性，多酚具有抗肿瘤、抗病毒、抗衰老等方面的生理活性。多酚的这些生理活性与其具有的清除自由基和抗氧化性能密切相关。研究表明，多酚的抗氧化能力很强，它在阻止血脂升高的同时，还可以增加高密度脂蛋白的含量。因此，多酚可用在保健食品中，起到强身健体的功效，也可用于食品中，以延长食品的货架期。 光果莸CaryopteristanguticaMaxim.为马鞭草科莸属植物，在秦巴山区资源丰富，可用于治疗因酗酒过量所致的酒疮和湿疹等。本实验对光果莸多酚进行了测定，并对其清除自由基活性进行研究，为其资源合理的开发利用及质量控制提供理论依据。 一、器材 1.1材料 光果莸于200710初采自陕西省太白县，经陕西师范大学生命科学学院田先华教授鉴定为马鞭草科莸属植物光果莸CaryopteristanguticaMaxim.。 1.2试剂 没食子酸，陕西省药检所提供；VitC，福林酚，Sigma公司产品；硫酸亚铁，双氧水，水杨酸，95%乙醇，均为国产分析纯。 1.3仪器 FZ102微型植物粉碎机，黄骅市中兴有限责任公司产品；索氏提取器；HH8B数显恒温水浴锅，国华电器有限公司产品；旋转蒸发仪-RII，瑞士步琪有限公司产品；SHB?并笱?环水式真空泵，郑州长城科工贸有限公司产品；101型电热恒温鼓风干燥箱，上海跃进医疗器械厂；SL202N型药物电子天平，上海明桥精密科学仪器有限公司产品；UV1600紫外-可见分光光度计，北京北分天普仪器技术有限公司产品。 二、方法 2.1光果莸不同部位多酚的提取精密称取一定量的光果莸花、叶、茎粉末用石油醚作为溶剂于索氏抽提器中回流8h除去脂类，然后再用95%乙醇回流提取3次，合并提取液，减压浓缩后并定容至250ml容量瓶中备用。 2.2没食子酸对照品的配制精密称取没食子酸对照品10.0mg，用95%的乙醇溶解后定容至100ml的容量瓶中，得终浓度为100μg/ml的标准品溶液。 2.3标准曲线的绘制精密吸取浓度为100μg/ml没食子酸对照品溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6ml于10ml的容量瓶中，并分别补充适当95%乙醇至1.0ml。再分别加入0.5mlFRC溶液（0.25mlFRC溶液+0.25ml的蒸馏水），3min后，再分别加入1.5ml的Na2CO3(0.2g/ml)溶液，然后各补充7.0ml蒸馏水，振荡混匀后静置2h，以95%乙醇作为空白，调零，于760nm处测定其吸光值。绘制标准曲线，得回归方程为：Y=21.829X+0.0469，R2=0.9987。其中Y为吸光度，X为没食子酸对照品溶液浓度(mg/ml)。结果表明，没食子酸在0.001～0.006mg/ml的范围内呈良好的线性关系。 2.4方法学考察精密吸取100μg/ml对照品溶液，其他实验步骤同“2.3”项下，同一样品做6个重复，得RSD=0.9673%，所得数据的重现性较好；同一样品溶液反复测6次吸光值，得RSD=0.3962%，表明仪器精密度良好；在8h内对同一样品溶液每隔30min测1次吸光值，RSD=1.7756%，表明该实验体系在8h内基本稳定。 2.5样品溶液的制备将“2.1”项下所得光果莸各部位乙醇提取液浓缩至浸膏状，50℃干燥至恒重。精密称取干燥后的花、叶和茎的乙醇提取物各25mg于10ml容量瓶中，用95%乙醇溶解并定容，得终浓度为2.5mg/ml的样品溶液。 2.6待测样品溶液多酚含量测定采用Folin酚法，精密吸取待测样品溶液各1ml，按照“2.3”项方法对样品进行含量测定，每组实验重复3次。在标准曲线中查找质量浓度，计算光果莸多酚含量。 2.7光果莸不同部位多酚对羟自由基（OH?）的清除作用取7支具塞试管，分别向各试管中加入2.0mmol/LFeSO43.0ml，1.0mmol/LH2O23.0ml，振荡，摇匀。再分别加入6.0mmol/L水杨酸3.0ml，摇匀，于37℃水浴加热15min。加热完毕后，以蒸馏水调零，应用紫外分光光度计于510nm处测定吸光度Ai，然后分别向7支试管中加入样品溶液0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8ml，用蒸馏水补充各试管溶液至1.0ml，继续水浴15min，待加热完毕再次测定其吸光值Aj，其样品溶液自身颜色的吸光值为Ablank。抑制率按如下公式计算：抑制率（%）=(Ai-Aj+Ablank)/Ai×100% 2.8半数抑制率的计算IC50为半数抑制率浓度，也就是指自由基清除率为50%时的自由基清除剂的浓度，根