血液及骨髓标本的细菌检验.pptVIP

血液、骨髓标本的细菌学检验 一、标本采集 采集时间 发热初期（1-2天内）或高峰时期 用药之前（或下次用药之前） 采血部位和频率 多选肘静脉 （多部位或增加采血频率可提高检出率） 采血量及接种 为培养基的1/10为宜（成人5-10ml；婴幼儿1-5ml；儿童3-5ml） 注入培养基后，立即轻轻混匀（同时厌氧、需氧培养时，应先种厌氧） 骨髓采集 适宜怀疑细菌性骨髓炎或长期用药患者，采1-2ml (二) 检验方法 检验程序：见表 血液/骨髓 增菌培养 (需氧、厌氧、CO2) 分离培养 涂片染色镜检 直接药敏 报 告 （一级报告） 需氧及CO2 厌氧 鉴 定 生化反应 血清学 鉴定 药敏试验 确定报告 报 告 （二级报告） （ BA、CA ） （厌氧BA） 涂染检 菌落形态 （三级报告） 血液标本的检验程序： 1. 增菌培养 培养基的选择 一般细菌—普通肉汤或酚红葡萄糖肉汤 布氏菌 — 肝浸液 甲链、脑膜炎球菌—胰胨肉汤或葡萄糖肉汤 厌氧菌 — 硫乙醇酸盐肉汤、牛心脑浸液 L型菌 — 加10%蔗糖 可疑心内膜炎持续培养阴性者，培养基内需 加维生素-B 添加药物拮抗剂： 用过氨基糖苷类、多粘菌素—加聚茴香脑磺酸钠（SPS）0.25-0.5g/L 抗磺胺药—加对氨基苯甲酸0.5%（10ml/L） 抗链霉素、四环素、新霉素及多粘菌素B—硫酸镁(24.7%，20ml加入1000培养基中) 抗青霉素—青霉素酶（2u/ml） 接种2-3个血培养瓶，同时做需氧、CO2和厌氧培养。每日观察一次，培养结果观察，注意培养基的变化： 一般细菌 — 浑浊 致病性葡萄球菌 — 胶东状态凝固 链球菌 — 颗粒状，沉于瓶底 溶血链球菌 — 有溶血现象 多数革兰阴性菌 — 浑浊，酚红变色 微浑浊，有绿色 — 疑为肺炎链球菌 有菌膜，浑浊，有绿色荧光 — 铜绿假单胞菌 表面有灰白色菌膜，液体较清亮—枯草杆菌或类白喉杆菌 需氧瓶无菌生长，厌氧瓶有生长现象——为厌氧菌 2.常规培养 增菌培养长了细菌以后： 1.挑取培养物涂、染、镜检，将镜检结果报告给 临床医生（一级报告） 2.分离培养：镜检有细菌，排除污染后，取瓶底培养物接种BA、巧克力等。 同时进行初步药敏试验，并将结果报告临床医生（为二级报告）。 3.对分离细菌进行鉴定：涂片染色，生化反应，血清学等；标准化药敏，发出报告（第三级报告） 第三级报告（检验单）方式： 培养----天有----细菌生长 阴性结果报告： 增菌未发现细菌生长，继续培养到第7天，经3次以上的盲转，可报告： 经---天培养无菌生长 3.特殊培养 草绿色链球菌 初代、次代应接种3瓶胰酪蛋白大豆肉汤同时做需氧、厌氧及CO2培养 第一周转种BA，如有细小、针尖样凸起并有草绿色溶血环的菌落，按链球菌鉴定，报告“有草绿色链球菌生长”。 如培养7天无菌生长，则需继续培养至第四周，每周移种2次，涂片染色镜检，仍无菌，报告：4周培养无草绿色链球菌生长。 脑膜炎奈瑟菌培养 增菌培养基：葡萄糖肝浸液、胰胨肉汤 瓶内先充入5-10%的CO2气体，培养基先预温 沙门菌培养 增菌培养基：葡萄糖胆汁肉汤或胆盐肉汤 疑有菌生长—SS、MAC等培养基分离—KIA初步鉴定—系统生化反应、血清学鉴定、药敏试验 布氏杆菌 增菌培养：血—2瓶肝浸液肉汤（1瓶先充CO2，1瓶普通培养）—出现肉眼可见的浑浊、菌膜、粘性沉淀物—涂片染色镜检—移种2个肝浸液平板（同上培养）—涂、染、镜检—生化反应、血清学凝集—最终报告 阴性报告：培养3-4周无菌，则报告“经-周培养无菌生长”。 厌氧菌培养 程序：血—牛心浸液或肝浸液，置厌氧环境—如出现浑浊、恶臭或产气—涂片染色镜检—培养物移种2个BA\CA,分别进行厌氧和需养培养，48-72小时长菌—据形态、生化反应进行最后鉴定—药敏—报告“厌氧培养有—细菌生长”。 阴性报告 如48h无菌生长—盲转—以后每隔4d做一次盲转，至14日，若仍无菌，则报告“厌氧培养14d无菌生长”。 L-型细菌培养 标本—种入高渗培养基增菌—移种BA和L型细菌培养基分离，如有“油煎蛋”样菌落—反复传代接种使之反祖—鉴定 对不能返祖的需与支原体鉴别 经1月培养仍无菌生长者可报告阴性 真菌培养 常用SA作真菌分离培养 鼠疫杆菌、钩端螺旋体、立克次体 可将患者血液接种于动物，更易得到阳性结果。 临床意义 从血液、骨髓检出任何细菌都具有意义。但必须排除采样、或无菌操作不严