青蒿素对野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压肺血管重塑的作用.pdfVIP

摘 要 摘 要 肺动脉高压（pulmonary arterial hypertension, PAH ）是以肺血管重构并伴有内皮细 胞功能紊乱、平滑肌细胞过度增殖，肺动脉阻力升高进而导致右心衰竭为特征的一种 进行性疾病，预后极差，病死率高，尚无药物可完全治愈。已有研究表明，抑制泛素蛋 白酶体功能可体外抑制肺动脉高压肺血管平滑肌细胞的增殖，降低肺血管壁的厚度。 青蒿素及其衍生物是一类高效低毒的抗疟药物。以往研究对疟疾治疗时发现青蒿素可 协同蛋白酶体抑制剂的作用，然而其在肺动脉高压中的作用尚不明确。因此本研究通 过一次性腹腔注射50mg/kg 野百合碱（monocrotaline, MCT ）构建肺动脉高压大鼠模型， 用60mg/kg 青蒿素连续给药28 天，采用HE 染色、Masson 染色及免疫荧光染色观察青 蒿素对大鼠肺动脉压、右心肥厚，肺血管重塑等的影响，Western Blot 检测肺样品泛素 化核心蛋白VCP （Valosin Containing Protein,VCP ）的表达、血管重塑相关蛋白IP3R3 表达差异，初步探讨其作用机制，揭示青蒿素的治疗潜力。主要结果如下： （1）右心导管血流动力学结果提示，相比对照，野百合碱模型组 28 天后大鼠肺 动脉平均压力极显著升高（p 0.001 ），青蒿素组该指标显著降低（p 0.001 ）。 （2 ）HE 染色、Masson 染色观察结果显示，相比对照，MCT 组大鼠的右心极显著 肥厚（p 0.001 ），肺小动脉肌化重构（p 0.001 ），青蒿素处理减轻了MCT 组大鼠的心 脏肥厚程度（p 0.01 ）、纤维蛋白沉淀和肺小动脉的肌化程度（p 0.01 ），对肺动脉高压 的发生发展起到一定的保护作用。 （3 ）免疫荧光染色 α-SMA 和 VCP 结果显示，相比对照，泛素化降解核心蛋白 VCP 在MCT 组中表达及分布增多，而青蒿素组表达量下降，提示VCP 参与了肺动脉 高压的形成，青蒿素可能通过调节泛素化对肺动脉高压的发生发展产生影响。 （4 ）血相分析结果显示相比对照，MCT 组大鼠的血液RBC 、 HCT%、HGB g/dl 升高 （p 0.05 ），青蒿素组干预后大鼠血氧饱和度提升，以上指标明显降低 （p 0.05 ）。 （5 ）蛋白质印迹检测对照组、药物载体组、MCT 组和青蒿素干预组中VCP 、IP3R3 的表达。相比对照，MCT 组肺组织中IP3R3 上调，VCP 上调（p 0.001 ），青蒿素干预 后恢复至于对照无差异（p ＞0.05 ）。肺动脉高压血管平滑肌中IP3R3 上调（p 0.001 ）， VCP 下调（p 0.05 ）。青蒿素组缩小差异。 综上述，本研究表明青蒿素有效改善肺血管重塑来减缓肺动脉高压发生发展，揭 示了青蒿素重要的治疗潜力，为靶向治疗提供参考，因此具有重要意义。 关键词：野百合碱；肺动脉高压；血管重塑；青蒿素；大鼠 I 目 录 目 录 摘 要 I ABSTRACT II 第一章 肺动脉高压、青蒿素和VCP 、IP3R3 的研究进展 1 1.1 肺动脉高压的研究1 1.1.1 肺动脉高压的分类及特性1 1.1.2 肺动脉高压的临床症状、病理变化及诊断3 1.1.3 肺动脉高压的发病分子机制5 1.2 青蒿素的研究现状9 1.2.1 青蒿素的结构与功能9 1.2.2 青蒿素及其衍生物抗肿瘤机制 10 1.2.3 青蒿素的应用 12 1.3 泛素化研究内容概况 13 1.3.1 泛素蛋白酶体系统组成 13 1.3.2 VCP 的结构和功能 14 1.3.3 p97 调节E