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蛋白表达不同检测方式的比较和分析 免疫组化法 (immunohistochemistry ) 原理： 免疫组化，是应用免疫学基本原理 —— 抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合 的原理，通过化学反应使 标记抗体 的显色剂 （荧光素 、酶、金属离子、 同位素 ）显色来确定 组织细胞内抗原（多肽和蛋白质） ，对其进行定位、定性及定量的研究，称为 免疫组织化学技 术(immunohistochemistry )或免疫细胞化学技术 (immunocytochemistry ) 。 特点：是融合了免疫学原理 （抗原抗体特异性结合）和组织学技术 （组织的取材、固定、 包埋、切片、脱蜡、水化等） ，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、 同位素 )显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的研究 (主要是定位 )。样本是 细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。 蛋白免疫印迹 ( Western Blot ) 原理：蛋白质印迹法是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物 NC 膜或 PVDF 膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。 特点： 先要进行 SDS，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上， 而后利用抗原 -抗体 -标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。 ELISA 检测 原理： 酶联免疫吸附剂测定法，简称酶联免疫法，或者 ELISA 法，它的中心就是让抗体 与酶复合物 结合，然后通过显色来检测。 特点： 用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或 组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作 上 开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面， 从而使后来形成的抗原 -抗体 -酶-底物复合物 粘附在载体上，这就是 吸附“ ”的含义。 免疫组化和 elisa 所用到的原理 大致相同， 只是因为所检测的样品不同， 从而在操作方法 上有所不同。 Elisa 多用于定量分析，其灵敏度非常高。 3 种蛋白检测水平的比较 蛋白检测方式 免疫组化法 Western blot 法 ELISA 试剂盒法 相同点 原理：抗体 - 抗原结合反应 样品类 组织或细胞 组织或细胞 血清、血浆、尿液、 型 细胞或组织培养上 清液 分析方 定位、定性及定量的研究 可以用于 定性和半定 多用于 定量分析，其 式 ( 主要是 定位 ，定位敏感性 量，定量较免疫组化 灵敏度非常高 远远高于 Western blot 法准确 法) 观察结 免疫组化图（膜阳性、质 电泳图（着色的位置 蛋白浓度 果 阳性和核阳性） 和着色深度） 优点 特异性强、敏感性高、定 分析容量大、敏感度 灵敏、特异、简单、