糖化血红蛋白方法学.docx

:血红蛋白的命名 HbA （：2 2 ）:又称主要成人血红蛋白，有2条a链和2条B链构成 的四聚体； HbA1:专指由离子交换色谱和电泳法所分离出来的糖化血红蛋白中 带负电荷增加的HbA组分被称为HbA1，包括HbAla, HbA1b, and HbAlc;也被称为快速糖化血红蛋白； HbAlc:葡萄糖与血红蛋白B链氨基酸末端缬氨酸残基结合产生的 一种特定的糖化血红蛋白； Total GHb:专指由亲和层析色谱方法所分离出来的所有糖化成分被 称为总糖化血红蛋白。 HbF（： 2 2）:胎儿血红蛋白的最主要成分，新生儿血中占 70-80%;于 生后6个月到2年后即可降至成人的正常浓度＜1% HbA2 （〉2 2）:又称次要成人血红蛋白，升高提示地中海贫血 HbAlc的形成 ProhlnNHS HC=O+ HCOH ? M *HOCHHCOHHCOHCHiOHN-CHHCOH HOCHHCOHI Prohln NHS HC=O + HCOH ? M * HOCH HCOH HCOH CHiOH N-CH HCOH HOCH HCOH I -NHCHa HCOH Glucose 血红蛋白 葡萄糖 HCOH CH^H Aldamine(JabN?) 中间产物-LA1c HOCH HHCOHHCOH CH2OH (stable) HbA1c HbAlc的重要性 1?糖尿病是一种慢性病，它可引发多种慢性并发症，如心脏、血管、 眼睛、肾脏及神经系统等一系列病症 DCCT （糖尿病控制与并发症关系实验）研究显示严格控制血糖 可降低这些慢性并发症的发生和发展的程度；该实验中血糖控制 好坏以糖化血红蛋白HbA1c为评价指标。 DCCT实验最先确定了糖化血红蛋白 HbA1c在评价血糖控制指 标中的重要地位，现在所有的 NGSP方法均要求溯源到DCCT。 4?糖化血红蛋白（HbA1c）是糖尿病人管理的一个重要的指标，但 是迄今为止尚无一个被所有组织所承认的 HbA1c检测的国际标 准。 HbAlc与三个月平均血糖水平成正比 20 20 05 1015 205 O 5 0lx 0 5 10 15 20 5 O 5 0 lx )% /LdAbH 三个月平均血糖水平（mmol/L） MBG (mg/dl) = 35.6 x (%A1c) - 77.3 (Diabetes care 2002; 25:275-278) 2SD 范围（95%） CV（ %） When HbA1c=6.0% When HbA1c=6.5% 2.5% 5.7%-6.3% 6.17%-6.82 3% 5.64%-6.36% 6.11%-6.89% 4% 5.52%-6.48% 5.98%-7.02% 5% 5.4%-6.6% 5.85%-7.15% 四：A1c是一个要求高精密度的实验项目 非糖尿病 5% CV 糖尿病 6.46% 6.80% 7.14% 五：HbAlc检测方法介绍 目前，已在中国注册使用的HbAlc检测仪器大约来自十几个厂家 根据检测原理的不同主要分为三种方法 (1)根据电荷携带的不同 小柱法 琼脂糖电泳 离子交换层析/HPLC (2)根据结构的不同 亲和层析/HPLC 免疫分析 各检测糖化血红蛋白方法的精密度 精密度+ 精密度 + + ++ +++ +++++ LPLC HPLC* t HPLC法为国际推荐参考方法 六：检测方法优缺点对比分析 电泳法 胶体颗粒在一定条件下可以带有电荷， 带有电荷的胶体颗粒可以 借静电吸引力在电场中泳行，带正电荷者泳向负极，带负电荷者 泳向正极，此种现象称为电泳。 血清中各种蛋白质都有它特有的等电点， 各种蛋白质在各自的等 电点时呈中性状态，它的分子所带正电荷与所带负电荷量相等。 电泳法的局限性 1. 需成批进行样本分析，速度比较慢，无法进行实时检测 2. 自动化程度低，急诊插入、自动维护等功能比较欠缺。 3. 重复性差 4. 目前已经很少有实验室使用 亲和色谱法 1?糖化血红蛋白分子表面含葡萄糖的1,2-cis diol （顺式二糖醇），该 基团可与分析柱固定相上的硼酸基团成特异和可逆的结合； 根据亲和色谱的分离原理，所分离的产物不仅包括B链氨基酸末 端的糖化成分，也包括a链氨基酸末端和所有血红蛋白分子 ￡残 基的糖化成分，其最终结果应为总糖化血红蛋白； 总糖化血红蛋白结果需要通过校准品的校正后以 HbAlc结果报 告给客户，以使结果能够溯源到DCCT 免疫法 使用单克隆或多克隆抗体直接测定血红蛋白 B -链上糖基化的N 末端的4-8个氨基酸，从原理上来说对HbAlc上的糖基特异性好。 由于血红蛋白变异体的普遍存在， 对免疫法的准确性及重复性造 成挑战 生化仪上使用的免疫分析法一般需要占用两个分析通道，一个通 道检测总血红蛋白